--- стр. 1 ---
У Т В Е Р Ж Д Е Н А < ^ Ш Ё ? Ж Д А Ю »
Приказом Роздравнадзора
«М ед.Г арант»
от 200 г. №
В.В.Березовский
И Н С Т Р У К Ц И Я
по применению набора реагентов для определения активности а-амилазы
в сыворотке, плазме крови и моче
(а-Амилаза ПАРМА)
1 . Н а з н а ч е н и е .
Набор а-Амилаза ПАРМА предназначен для определения активности а-амилазы в сы
воротке крови человека кинетическим методом с 4,6-у-этилиден-(С7)-п-нитрофенил- (G1)-
a-D -мальтагептазидом (EPS-G7J в клинико-диагностических и биохимических лаборатори
ях, а также в научно-исследовательской практике.
Набор рассчитан на проведение 100 определений активности а-амилазы при расходе
1,0 мл рабочего реагента на один анализ.
2 . Х а р а к т е р и с т и к а н а б о р а .
2 . 1 . П р и н ц и п д е й с т в и я .
Определение активности а-амилазы основывается на гидролизе 4,6-у-этилиден-(07)-
п-нитрофенил-(С1)-а-0-мальтагептазида под воздействием фермента на различные фраг
менты. Далее они, в свою очередь, расщепляются а-глюкозидазой с образованием глюкозы
и «-нитрофенола, окрашенного в желтый цвет. Интенсивность окраски раствора пропор
циональна активности а-амилазы и определяется фотометрически при длине волны 405
(400-420) нм.
2 . 2 . С о с т а в н а б о р а :
- Реагент 1: HEPES, 52 ммоль/л, гидроокись натрия, 50 ммоль/л, натрий хлористый,
87,5 ммоль/л, кальций хлористый, 1,25 ммоль/л, а-глюкозидаза, 9000 Е/л, Тритон Х-100.
0,05 г/л, альбумин, 0,5 г/л, натрия азид 0,5 г/л- 1 флакон (80 мл);
“ Реагент 2: 4,6-у-этилиден-(07)-п-нитрофенил-(01)-а-0-мальтагептазид, 6 ммоль/л,
HEPES, 52 ммоль/л, натрия азид, 0,5 г/л - 1 флакон (20 мл).
3 . А н а л и т и ч е с к и е и д и а г н о с т и ч е с к и е х а р а к т е р и с т и к и н а б о р а .
Чувствительность - не более 40 Е/л.
Линейность. Набор обеспечивает линейность при определении активности а-амилазы в
диапазоне от 50 до 1000 Е/л с отклонением от линейности не более 5%.
Коэффициент вариации - не более 5%.
Инструкция составлена исполнительным директором ООО «Мед.Еарант» П.С.Смирновым
--- стр. 2 ---
Качество набора может проверяться по отечественным или зарубежным контрольным
сывороткам, аттестованным данным методом.
Активность а-амилазы в норме в сыворотке и плазме крови составляет до 100 Е/л, в
моче до 500 Е/л.
4 . М е р ы п р е д о с т о р о ж н о с т и п р и р а б о т е с н а б о р о м .
Меры предосторожности при работе с набором - соблюдение «Правил устройства,
техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и
личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиоло
гических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР»(Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые пер
чатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфициро
ванные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или лю
бой другой возбудитель вирусной инфекции.
5 . О б о р у д о в а н и е , м а т е р и а л ы и р е а г е н т ы :
5 . О б о р у д о в а н и е , м а т е р и а л ы и р е а г е н т ы :
- биохимический анализатор, длина волны 405 нм (400-420 нм), кювета с длиной опти
ческого пути 10 мм;
- пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкостей 0,1 и 1,0 мл;
- пробирки вместимостью 5-10 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые.
6 . А н а л и з и р у е м ы е п р о б ы .
Негемолизированная сыворотка крови.
7 . П р о в е д е н и е а н а л и з а
7 . 1 , П р и г о т о в л е н и е р а б о ч е г о р е а г е н т а .
Смешать необходимые количества реагентов 1 и 2 в соотношении 4:1. Рабочий реагент
стабилен при температуре 2-8° С не более 3 суток.
7 . 2 , П р о в е д е н и е а н а л и з а .
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице 1.
Непосредственно перед измерением нагреть рабочий реагент до 37° С.
Внести Опытная проба
Сыворотка, плазма крови моча 20 мкл
Рабочий реагент 1 О О О мкл
8 . Р е г и с т р а ц и я р е з у л ь т а т о в .
Перемешать и измерить оптическую плотность через 180 секунд (Е]) при длине волны 405
нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм и затем еще ровно через 60 секунд (Е 2).
--- стр. 3 ---
Рассчитать разницу ДЕ = Е2-Е1.
Активность а-амилазы в сыворотке и плазме крови рассчитать по формуле:
АЕ X 4554
где: АЕ - изменение оптической плотности за одну минуту, ед. опт. плотн.;
4554 - фактор пересчета для выражения активности а-амилазы в Е/л.
Активность а-амилазы в моче рассчитать по формуле:
АЕ X 4248
где: АЕ - изменение оптической плотности за одну минуту, ед. опт. плотн.;
4248 ~ фактор пересчета для выражения активности а-амилазы в Е/л.
9. У чет результатов реакции.
Ф
1 0 . У с л о в и я х р а н е н и я и э к с п л у а т а ц и и н а б о р а .
Хранение набора можно производить при температуре +2-8° С в упаковке предпри
ятия-изготовителя в течение всего срока годности (12 месяцев). Допускается хранение на
бора при температуре +25° С не более 7 суток.
Реагенты 1 и 2 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре 2-8*^С в те
чение всего срока годности наборов при условии достаточной герметичности флаконов.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по
применению набора.
По вопросам, касающимся качества набора а-АМИЛАЗА ПАРМА следует обращаться
в:
- ООО «Мед.Гарант» по адресу 614000, г. Пермь, ул. Сибирская, д. 9, оф. 420.
Исполнительный директор
ООО «Мед.Гарант» П.С.Смирнов
«СОГЛАСОВАНО»
зав. кафедрой клиническ
лабораторной диагност
ГОУ ДПО «РМАПО Ро Д .М .Н ., профессор Долгов В.В.
г.