Набор реагентов для иммуноферментного определения аллерген-специфического иммуноглобулина Е в сыворотке крови (2) ("ИммуноФА-Аллерген-2") по ТУ 9398-026-11361534-2011 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА Приказом Росздравнадзора от № А.М. Егоров 2011 г. ИНСТРУКЦИЯ ИО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЛЛЕРГЕН-СПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА Е В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (2) («ИммуноФА-Аллерген“ 2») 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов «ИммуноФА-Аллерген-2» предназначен для качественного определения аллерген-специфических антител класса Е в сыворотке крови человека методом ^ двухстадийного твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) на индикаторных полосках. Набор позволяет проводить также полуколичественную оценку результатов в соответствии с классами RAST. Иммуноглобулины класса Е (IgE) являются медиаторами аллергических реакций немедленного типа. Эти аллергические реакции развиваются при взаимодействии аллергена с фиксированными на клетках специфическими IgE. В результате активации иммуноглобулином Е тучных клеток и базофилов выделяется ряд цитокинов. При повторной встрече аллергена с сенсибилизированной тучной клеткой или базофилом он перекрестно связывается с IgE, фиксированным на поверхности эффекторных клеток. Это приводит к деградации клеток и высвобождению ими медиаторов аллергической реакции: гистамина, протеаз, лейкотриенов, простагландинов, а также цитокинов, усиливающих воспалительную реакцию и IgE-ответ. Результатом воздействия этих факторов является расширение периферических кровеносных сосудов, скопление эозинофилов и нейтрофилов в участке воздействия, повышение проницаемости капилляров, отек тканей, секреция слизи, сокращение гладкой мускулатуры. Период полураспада и выведения сывороточного IgE ^ составляет 2 - 3 дня, для антител, связанных с тучными клетками и базофилами - несколько недель. У здоровых лиц концентрация IgE в сыворотке крови может достигать 100 - 200 МЕ/мл. У лиц, склонных к атопическим реакциям, наблюдается более высокий уровень циркулирующих антител класса Е, а также более высокое, чем в норме, содержание эозинофилов. Клинические симптомы аллергических реакций немедленного типа (атопии) многообразны и могут проявляться в виде бронхиальной астмы, поллиноза (аллергического ринита, аллергического конъюнктивита), аллергодерматозов (атопического дерматита, острой крапивницы) и др. Исторически одной из первых иммуноаналитических тест-систем, использовавшихся для определения иммуноглобулинов Е к специфическим аллергенам в сыворотке крови, был радиоаллергосорбентный тест (RAST), в котором интенсивность реакции оценивалась в классах, соответствовавших определенным концентрациям антител IgE в сыворотке крови. Традиционно при полуколичественных анализах IgE применяется оценка результатов в классах RAST. Составлена: заместителем генерального директора Т.А. Поздняковой. --- стр. 2 --- Определение содержания специфических иммуноглобулинов класса Е в сыворотке крови используется в клинической практике для установления сенсибилизирующих аллергенов при диагностике аллергических заболеваний. Набор реагентов «ИммуноФ А-Аллерген-2» для более полной специфической аллергодиагностики целесообразно использовать в сочетании с набором реагентов «ИммуноФА-Аллерген», имеющим другую панель, включающую 26 аллергенов (13 ингаляционных и 13 пищевых). Набор рассчитан на проведение анализа 10 образцов сыворотки крови по 26 аллергенам (13 ингаляционным и 13 пищевым) в каждом. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ Принцип метода основан на твердофазном иммуноферментном анализе. Исследуемые образцы сыворотки крови инкубируют с индикаторной полоской, на рабочей мембранной поверхности которой в виде линий нанесены различные аллергены, а также положительный и отрицательный контроли. Аллергены, иммобилизованные на индикаторной полоске, связываются с соответствующими специфическими иммуноглобулинами Е, содержащимися в исследуемом образце. Образующийся комплекс антиген-антитело выявляют с помощью конъюгата моноклональных антител к IgE человека с пероксидазой. Количество связавшегося конъюгата определяют с помощью раствора субстрата (тетраметилбензидина с добавлением перекиси водорода). Интенсивность окраски линии, соответствующей по расположению определяемому аллергену, прямо пропорциональна содержанию аллерген- специфических антител класса Е к данному аллергену в исследуемом образце. 2.2. СОСТАВ НАБОРА: - индикаторные полоски - полимерные полоски с рабочей зоной из мембраны белого цвета, на которую в виде линий нанесены препараты аллергенов, а также положительный и отрицательный контроли, в пакетах с осушителем - по 10 шт. двух наименований: •Ингаляционные аллергены (голубая маркировка): •Пищевые аллергены (желтая маркировка): Положительный контроль Положительный контроль Отрицательный контроль Отрицательный контроль Лещина Лосось Дуб Курица Рожь Г овядина крапива Свинина Марь белая Рис Перо куриное Ржаная мука Эпидермис и шерсть морской свинки Овес Эпидермис и шерсть хомяка Картофель Эпидермис и шерсть кролика Сельдерей Эпидермис и шерсть крысы Капуста Пенициллиум Яблоко Кладоспориум Банан Домашняя пыль Шоколад/какао Примечание. Допускается изначальная слабая желтоватая или сероватая пигментация линий некоторых аллергенов. --- стр. 3 --- - конъюгат моноклональных антител к IgE с нероксидазой, готовый для использования - 1 фл. (18,5 мл); “ проявляющий раствор (раствор субстрата на основе тетраметилбензидина (ТМБ) с добавлением перекиси водорода), готовый для использования - 1 фл. (18,5 мл); - пробирки пластиковые - 30 шт.; - флакон пластиковый для промывания полосок - 1 шт.; - трафарет-2 с указанием расположения линий аллергенов, положительного контроля и отрицательного контроля на индикаторных полосках; - карточка «Шкала приблизительного соответствия интенсивности окраски классам RAST» - 1 шт. 3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Специфичность. Не обнаружено перекрестной реактивности моноклональных антител к IgE с иммуноглобулинами изотипов G и М и другими компонентами сыворотки крови человека. Чувствительность. Минимальная концентрация IgE, определяемая с помощью набора, соответствует 1-му классу RAST (около 0,35 МЕ/мл). 4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Потенциальный риск применения набора - класс 1 . Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными. При работе с набором и утилизации отходов следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно- эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.). При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита и другие возбудители вирусных инфекций. 5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ: - Пипетка полуавтоматическая одноканальная с переменным объемом со сменными ^ наконечниками, позволяющая отбирать объемы жидкости 200-1000 мкл; - шейкер горизонтальный; - штатив для маленьких пробирок (типа Эппендорф); - секундомер или часы; - вода дистиллированная; - бумага фильтровальная; - перчатки резиновые или пластиковые. 6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Исследуемые образцы крови для получения сыворотки собирают в сухие пробирки. До проведения анализа возможно хранение образцов сыворотки крови не более 2 дней при температуре +(2-8)®С или в замороженном состоянии при температуре минус 20*^С не более 2 месяцев. Допускается только однократное замораживание и размораживание образцов сыворотки крови. После размораживания образцы следует тщательно перемешать. Тепловая инактивация сывороток не допускается. --- стр. 4 --- 7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА Внимание! Компоненты набора и исследуемые образцы перед проведением анализа должны быть доведены до комнатной температуры +(18-25”С) и тщательно перемешаны. 7.1. Установить в штативе необходимое количество пластиковых пробирок (по числу исследуемых образцов) и подписать их. 7.2. Вскрыть пакеты и извлечь по одной индикаторной полоске с голубой и желтой маркировкой (держать за цветную часть) для каждого исследуемого образца. Подписать полоски на цветной части тонким фломастером и поместить их вместе (изнаночной стороной друг к другу) в пробирку. Возможна раздельная постановка ингаляционной и пищевой панелей. Примечание. Не следует прикасаться к рабочей зоне (белая мембрана) индикаторной полоски. Внести в каждую пробирку образец - по 0,8-09 мл неразведенной сыворотки крови так, чтобы сыворотка покрывала всю рабочую зону полоски (белую мембрану). Проследить, чтобы внутри пробирки не осталось пузырьков воздуха (при наличии пузырьков воздуха постучать по пробирке, полоски несколько раз извлечь и опустить обратно в пробирку). Примечание. Обратите внимание на то, что образцы сыворотки крови добавляются в пробирки с уже помещенными туда индикаторными полосками. 7.3. Инкубировать в течение 2 ч при комнатной температуре на шейкере при легком встряхивании (при отсутствии шейкера увеличить время инкубации до 4 ч). Для повышения чувствительности рекомендуется увеличить время инкубации до 10-15 часов (ночная инкубация с образцами сыворотки крови) при комнатной температуре без встряхивания. Во избежание испарения сыворотки в случае ночной инкубации пробирку с индикаторными полосками следует накрыть (например, химической пробиркой или стаканом). 7.4. Извлечь полоски из пробирок, ополоснуть струей дистиллированной воды. Затем опустить полоски в пластиковый флакон вместимостью 20 мл и заполнить его дистиллированной водой до сужения горлышка так, чтобы вода полностью покрывала рабочую зону полосок. Промыть полоски, поместив флакон на шейкер, либо «прополаскивая» их во флаконе вручную, в течение 2-3 мин. Повторить промывку еще 2 раза, каждый раз меняя дистиллированную воду. 7.5. Поместить индикаторные полоски в чистые пластиковые пробирки. Затем в каждую пробирку внести по 0,8-09 мл конъюгата. Обратить внимание на то, что конъюгат должен покрывать всю рабочую зону полоски. 7.6. Инкубировать в течение 1 ч при комнатной температуре на шейкере при легком встряхивании (при отсутствии шейкера увеличить время инкубации до 2 ч). 7.7. Извлечь полоски из пробирок, ополоснуть дистиллированной водой и промыть согласно п. 7.4 не менее трех раз. 7.8. Поместить индикаторные полоски в чистые пластиковые пробирки. Затем в каждую пробирку внести по 0,8-09 мл проявляющего раствора (проявляющий раствор должен покрывать всю рабочую зону полоски) и инкубировать в течение 10-15 мин при комнатной температуре. Примечание. Не следует допускать высыхания индикаторных полосок на промежуточных стадиях проведения анализа. 7.9. Извлечь индикаторные полоски из пробирок, ополоснуть струей дистиллированной воды, положить на чистый лист бумаги мембраной вверх и оставить сушиться примерно на 20 мин при комнатной температуре в темноте. --- стр. 5 --- 8. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ 8.1. Учет результатов проводится визуально на полностью высохших индикаторных полосках. Оценка результатов - качественная (путем сопоставления линий па исследуемой индикаторной полоске и на трафарете) и затем, при необходимости, полуколичественная (путем визуального сравнения интенсивности окраски линии аллергена на индикаторной полоске с цветовой «Шкалой приблизительного соответствия интенсивности окраски классам RAST»). 8.2. При качественной оценке результатов приложить индикаторную полоску к вложенному в набор трафарету так, чтобы линия положительного контроля на полоске совпала с линией положительного контроля на трафарете. При правильно проведенном анализе линия положительного контроля окрашена в сине-фиолетовый цвет, а отрицательного контроля - не окрашена. В случае положительной реакции на какие-либо аллергены линии соответствующих аллергенов имеют сине-фиолетовую окраску. 8.3. При полуколичественной оценке результатов производится визуальное сравнение интенсивности окраски линии аллергена на индикаторной полоске с цветовой шкалой карточки «Шкала приблизительного соответствия интенсивности окраски классам RAST». Интенсивность окраски каждого прямоугольника на карточке соответствует началу класса RAST. Например, если интенсивность окраски линии аллергена на полоске находится между 1 + и 2+, то это соответствует 1 -му классу RAST. В таблице приведено приблизительное соответствие класса RAST содержанию аллерген-специфических антител класса Е в сыворотке крови. Класс RAST Интерпретация результатов 0 Отсутствие или наличие очень небольшого количества аллерген- специфических антител класса Е 1 Низкий уровень антител 2 Средний уровень антител 3 Высокий уровень антител 4 Очень высокий уровень антител 9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА 9.1. Набор реагентов «ИммуноФЛ-Аллерген-2» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре +(2-8)^С в течение всего срока годности - 12 мес. Допускается хранение набора при температуре до +25^С не более 7 сут. Замораживание компонентов набора не допускается. 9.2. Неиспользованные индикаторные полоски после вскрытия упаковки могут храниться в том же пакете (с осушителем), плотно закрытом или заклеенном липкой лентой, при температуре +(2-8)”С в течение всего срока годности. 9.3. Конъюгат и проявляющий раствор после вскрытия флаконов можно хранить при температуре +(2-8)°С в течение всего срока годности. 9.4. Следует избегать воздействия яркого света на реагенты во время хранения и инкубации. 9.5. До проведения анализа возможно хранение образцов сыворотки крови не более 2 дней при температуре +(2-8)°С или в замороженном состоянии при температуре минус 20”С не более 2 мес.