--- стр. 1 ---
У Т В Е Р Ж Д Е Н А
П риказом Росздравнадзора
От _______________20____г.
№
У Т В Е Р Ж Д А Ю »
;>ный директор
АБРИС+»
. М арковский
2009 г.
И Н СТРУ К Ц И Я
по применению набора реагентов для определения активности
аспартатаминотрансф еразы в сы воротке крови колориметрическим методом
(«АСТ-АБРИС+»)
^Н азначение
Н абор предназначен для количественного определения активности
аспартатаминотрансф еразы в сы воротке колориметрическим методом в клинико-
диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской п р ак ти к е.
Н абор рассчитан на проведение 1000 определений при конечном объеме пробы 3,0 м л .
2.Х арактеристика набора.
2.1.П ринцип метода
L - a c n a p m a m + а - к е т о г л у т а р а т < ■-------A C T
-------■ > о к с а л а ц е т а т + Ь - г л у т а м а т
К оличество образовавш егося в ходе ферм ентативной реакции оксалацетата определяется
на основе его реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФ Г), результатом которой
явл яется окраш енны й ком плекс, имею щ ий м аксим ум поглощ ения при длине волны 540
н м .
И нструкция составлена директором по науке О О О «Н П Ф АБРИ С+», к.б.н. Ю .Г .П оповы м и
заведую щ им кафедрой клинической лабораторной диагностики С П бМ А П О , д.м.н.,
профессором А.В.Козловы м.
--- стр. 2 ---
2.2. Состав набора
В состав набора реагентов входят следующие компоненты;
- Реагент 1 [L-аспартат натрия - 100 ммоль/л; Na 2HP 0 4 , 100 ммоль/л;
а-кетоглутаровая кислота- 15 ммоль/л] - готов к применению - 1 флакон 250 мл;
- Реагент 2 [2,4 динитрофенилгидразин ~ 1 ммоль/л; кислота соляная, 100 ммоль/л] -
готов к применению - 1 флакон 250 мл;
- калибратор [пируват натрия -- 1 ммол/л] - готов к применению -1 флакон, 5,0 мл.
- Реагент 3 [натрий едкий - 4 моль/л] - перед применением равести дистиллированной
водой в 10 раз - 1 флакон 250 мл;
3. А налитические и диагностические характеристики набора.
3.1. Линейность
Линейная область определения активности ACT в диапазоне от 0,1 до 4,0 ммоль/л в час,
отклонение от линейности не более 5%.
3.2. Воспроизводимость
Коэффициент вариации результатов определений - не более 5%.
3.3. Н ормальны е величины : 0 ,1 2 - 0,68 ммоль/л в час.
4. М еры предосторожности
Потенциальный риск применения набора - класс 2а (ГОСТ Р 51609-2000).
При работе с набором необходимо соблюдать "Правила устройства, техники
безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной
гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических
учреждений системы Министерства здравоохранения СССР", Москва, 1981 г.
При работе с биологическими жидкостями следует надевать одноразовые резиновые или
пластиковые перчатки, так как образцы биологических жидкостей человека являются
потенциально инфицированным материалом, способным длительное время сохранять или
передавать возбудителей различных инфекций.
Все использованные материалы дезинфицировать в соответствии с требованиями МУ-287-113.
5. Оборудование, м атериалы и реагенты
- спектрофотометр, длина волны 540 нм, кювета с длиной оптического пути 1,0 см;
- секундомер;
-термостат, поддерживающий температуру 37±1°С;
- пипетки полуавтоматические одноканальные с фиксированным или переменным
объемом со сменными наконечниками;
- перчатки хирургические резиновые или пластиковые.
2
--- стр. 3 ---
6. А нализируемые пробы
Сыворотка крови. Гемолиз недопустим. Исследование должно быть проведено в день
забора образца, так как активность ACT снижается независимо от температуры хранения.
7. Проведение анализа
Реагент 3 следует развести бидистиллированной водой, свободной от карбонатов, в
соотношении 1:9. Полученный 0,4 моль/л раствор NaOH хранить в пластиковой
герметичной таре.
ПРОЦЕДУРА АНАЛИЗА:
Поместить в
пробирки
Опытная
проба, мл
Контроль на
реактивы для
пробы, мл
Калибратор,
мл
Контроль на
реактивы для
калибратора, мл
Реагент 1 0,25 0,25
Сыворотка крови 0,05
Смешать и инкубировать в водяной бане при 37 °С 60 мин
Калибратор 0,05
Вода
дистиллиров.
0,25 0,3
Реагент 2 0,25 0,25 0,25 0,25
Сыворотка крови 0,05
Смешать и инкубировать при 18-25 °С 20 мин
0,4 моль/л NaOH 2,5 2,5 2,5 2,5
Смешать и инкубировать при 18-25 °С 5 мин
X = 540 нм;
d = 1 см;
Измерить оптическую плотность пробы (Епробы) и калибратора (Е калибратора) проти!
соответствующих контролей на реактивы. Окраска стабильна не менее 30 минут посл^
окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света. При активности ACT
превышающей 4 ммоль/л в час, образец следует развести физиологическим раствором. Hpt
расчете активности учесть степень разведения.
_____________________________________________
8. Расчеты:
прооы
к али братор а
9. У словия хранения и эксплуатации набора
Срок годности набора - 12 месяцев.
Хранение наборов в упаковке предприятия-изготовителя должно производиться в
темном месте при температуре 18-25°С в течение всего срока годности.
Для проведения процедуры анализа рекомендуется использовать полуавтоматические
одноканальные пипетки, ачтестованные на точность по значению средней дозы и сходимости
результатов дозирования.