Система диагностическая проточной цитометрии CyFlow Counter с принадлежностями — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- flj w Ворошилов Н.А. «26» апреля 2010г. Тральный директор •О ««Эко-мед-с М» ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ Система диагностическая проточной цитометрии CyFIow Counter с принадлежностями 1. НАЗНАЧЕНИЕ 2. ОСНОВНЫЕ ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3. ПОДГОТОВКА К РАБОТЕ ИЗ ДЕЛРЕЯ 4. ПОРЯДОК РАБОТЫ ИЗДЕЛРЕЯ 5. ПРАВИЛА ХРАНЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНРЕЯ 2010 г. --- стр. 2 --- Содержание Содержание ...................................................................................................................................................................... Предисловие ................................................................................................................................................................... Теория ................................................................................................................................................................................... Введение в проточную цитометрию ...................................................................................................... Проточная кювета и световые сигналы ............................................................................................. Настройка оптического стандарта - Параметры и фильтры ............................................. Действительный объемный абсолютный счет .............................................................................. Традиционные приточно-цитометрические методики для абсолютного счета Эксплуатация .................................................................................................................................................................. Процедура ежедневного запуска............................................................................................................. Выполнение замера ......................................................................................................................................... Процедура ежедневного останова ......................................................................................................... Подробное описание программного обеспечения: CyView .......................................................... Меню программного обеспечения.......................................................................................................... Сенсорная панель ............................................................................................................................................. Клавиатура ............................................................................................................................................................... Внешняя мышь и клавиатура .................................................................................................................... Функции программного обеспечения ................................................................................................... Config-Script ................................................................................................................................................... Measure-Script............................................................................................................................................... Regions ............................................................................................................................................................... Пусковое устройство/L-L....................................................................................................................... Коэффициент усиления ........................................................................................................................ Скорость образца ....................................................................................................................................... Сохранение ..................................................................................................................................................... Распечатка ...................................................................................................................................................... Устранение неисправностей ................................................................................................................................ Что делать, если .................................................................................................................................................. Необходимая очистка проточной кюветы ......................................................................................... Приложение .................................................................................................................................................................... Требования к установке ................................................................................................................................. Настройка счетчика CyFlow®...................................................................................................................... Основные схемы подключения ....................................................................................................... Техническое обеспечение и обслуживание ............................................................................................. Техническое обеспечение.............................................................................................................................. Обслуживание ........................................................................................................................................................ Транспортировка и хранение...................................................................................................................... Утилизация ............................................................................................................................................................... Безопасность при работе с лазерами .......................................................................................................... Счетчик CyFlow® - Технические условия ................................................................................................ Для инвитро диагностики использовать с прибором Partec рекомендованные инвитро реагенты. Проточный цитометр счетчика Partec CyFlow® соответствует европейской Директиве инвитро диагностики 98/79/ЕС и, таким образом, маркируется значком СЕ. © 2008 Partec GmbH Otto-Hahn-Str. 32 48161 Munster Germany Рев. 001 Дата 2008-03- ..2 .. 3 ..4 „4 ..4 .. 5 ..7 .. 7 ..9 .. 9 .11 12 13 13 16 16 16 17 17 17 17 18 19 19 20 20 21 21 21 22 22 22 22 23 23 23 23 23 24 25 ■25 --- стр. 3 --- Предисловие Счетчик CyFlow® представляет собой Систему для проточной цитометрии (FCM) компании Partec. Он оборудован зеленым (532 нм) твердотельным лазером и тремя оптическими параметрами для обнаружения бокового рассеивания (SSC), оранжевыми (FL2) и красными (FL3) флуоресцентными сигналами. Прибор предназначен для контроля иммунного состояния больных ВИЧ и СПИДОМ (кон троль ВИЧ). Он предлагает возможность абсолютного счета положительных Т-клеток CD4 (CD4+), определения Т-клеток CD4+ среди лимфоцитов (CD4%) и абсолютных величин Т-клеток CD3+ и CD8+. Определение процентного содержания CD4 согласно Всемирной Организации Здравоохране ния (WHO) является клинически соотнесенным параметром для определения возникновения высоко активной антиретровирусной терапии у детей. Руководство по эксплуатации счетчика CyFlow® дает краткий обзор метода проточной цитометрии и физических явлений. Для дальнейшей подробной информации просьба обращаться к литературе (например, Говард М. Шапиро: Практическая проточная цито метрия, Уайли, 2002). В других главах дается пояснение эксплуатации и предоставляется дальнейшая подробная информация о программ ном обеспечении. Для более подробной информации о комплектах реагентов, пригодных для использования со счет чиком CyFlow®, просьба обращаться к соответствующим спецификациям. Имеется также несколько Указаний по применению. Если у вас возникают вопросы, просьба обращаться к вашему местному дистрибутору, одной из до черних компаний фирмы Partec или самой компании Partec в Германии. Дальнейшую подробную информацию и адреса можно найти на нашем веб-сайте по ссылке: www.partec.com/distributors supportcenter@partec.com Каждый запрос должен сопровождаться следующей информацией: -Серийный номер счетчика CyFlow® -Ваш полный контактный адрес --- стр. 4 --- Теория Введение в проточную цитометрию Термин Проточная Цитометрия описывает методику для анализа клеток - или частиц - в водной суспен зии, которая в настоящее время используются регулярно. Клетки или другие биологические частицы проходят в текучий, одиночный поток клеток с помощью измерительной аппаратуры. В наиболее рас пространенных сценариях, один или несколько лазеров опрашивают каждую частицу и, как минимум, система замеряет степень и направление рассеянного света - показатели размера частиц, форм и структуры. Если частицы были окрашенных одной или несколькими флуоресцентными красками - из вестными как флюорохромы - источник света побуждает эти краски предоставить дополнительную био логическую информацию о каждой частице, такую как наличие специфических маркеров клеточной поверхности. Уникальное преимущество Проточной Цитометрии заключается в том, что она может бы стро и количественно замерять множество одновременных параметров отдельных живых клеток. Проточная кювета и световые сигналы 1. Проточная кювета Основным элементом проточного цитомера счетчика CyFlow® является проточная кювета. Она выполнена из кварцевого стекла, которое состоит из капилляров диаметром 200 х 350 рм. РАССЕЯНИЕ ВПЕРЕД 2. Струйная автоматика Жидкостная система проточного цитометра используется для транспортировки частиц из суспен зии произвольного трехмерного образца подвески на упорядоченный поток частиц, движущихся за одним один или более лучей подсветки. Жидкостная система использует регулирование дав ления воздуха в целях обеспечения стабильной работы и состоит из линии жидкой оболочки и пробоотборной линии, водимых в проточную кювету. Так как образец поступает поток в камеру проточной кюветы, наружная, быстро текущая жидкая оболочка, гидродинамическим способом фокусирует эту жидкую оболочку в узкой активной зоне в пределах струи и представляет одиноч ный блок частиц на источники возбуждения. Эта геометрия обеспечивает повышенную точность позиционирования в точке опроса лазера для последовательного излучения возбуждения и зна чительно сокращенной блокировки частиц проточной кюветы. 3. Рассеивающие сигналы Ячейки счетчика CyFlow® проходят одиночный блок с помощью лазерного луча, сосредоточенного на капилляре. Это приводит к рассеянию света, предоставляющего информацию о различных кле точных характеристиках. Интенсивность вперед рассеянного света (FSC) согласуется с размером клетки. Более мелкие клетки вырабатывают более слабый сигнал, а более крупные клетки выраба тывают более сильный сигнал. Свет бокового рассеивания (боковое рассеивание, SSC) излучается по углом 90°, и дает информацию о “зернистости” клетки. Клетки с высокой зернистостью вырабаты ваю более сильный сигнал в SSC. Это происходит из-за высокой степени преломления зерен. --- стр. 5 --- Руководство по эксплуатации счетчика CyFlow® 4. Флуоресцентные сигналы Флуоресценция происходит, когда молекула, возбужденная светом одной длиной волны, возвра щается к пониженному состоянию путем излучения свете большей длиной волны. Клетки могут распределяться по подтипам путем выбора конкретных эпитопных антител отмеченных флюо рохромом. Настройка оптического стандарта - Параметры и фильтры Счетчик CyFlow® оснащен тремя оптическими параметрами для выявления бокового рассеянного света (SSC), оранжевой (FL2) и красной флюоресценцией (FL3). Боковой рассеянный свет и флуо ресцентный свет собираются с помощью микроскопического объектива под углом 90°. Затем свет подразделяется на различные длины волн с помощью оптических фильтров (см. рис. ниже). 1. Сигнал, обрабатываемый фотоэлектронным умножителем (РМТ) На следующем этапе, фотоумножитель собирает различные длины волн света, которые выраба тывают электронный импульс. Амплитуда пропорциональна количеству входящих фотонов. По сле линейного или логарифмического усиления импульсы затем преобразуются в электронные сигналы при помощи преобразователя Analog/Digital-Converter (ADC). Для замеров CD4- и CD4%, применяется только логарифмическое усиление. Так как интересующая частица проходит через фокус, флуоресцирует и обнаруживается фотодетектором, электрический пульс вырабатывается и подается на обработку сигнала электроникой. Прибор срабатывает, когда этот сигнал превы шает заданный пороговый уровень. Порог, в основном, используется для отбраковки событий, не ввязанных с частицами, таких как инородные вещества или помехи от оптических и электронных источников. 2. Оптический фильтр Оптический фильтр позволяет только передавать определенную длину волны, в то время как остальной свет абсорбируется. Различаются три типа фильтров: a. Полосовой фильтр Позволяет передавать свет в пределах небольшого диапазона длины волны. b. Длинный фильтр Позволяет передавать свет в пределах свыше определенной длины волны. c. Короткий фильтр Позволяет передавать свет в пределах ниже определенной длины волны. Лазер Оптика лазера о FL2 оранжевый ^ -------□ FL3 красный Проточная кювета --- стр. 6 --- 3. Отображение замера Данные отображаются либо на гистограмме 1-Parameter (CD4), либо на точечном плане 2-Parameter (CD4%). ( yV>rv> 1 .1 - пиреrrfni • tOMpufcentj - Configured (NG -. I) m , П4оМ1 Мар |,лгдаде I (’okNKl! ijeip ____________~ IV- C04 i 1 j * 1 i _ _ / i \ L....L '*• П ч „> * ^ 1 I ‘ CIM 3913 33 (LocftlAfimiri) I d ■ Ш - )! HKSUI.rS С 1)4% СП 4 LYM Uolll»« Г r«r.l#ntir): noN**? S 1U «1 j 8м»р1*И> 1 91-:. O . CP4percent. £-30 A, t Г AJ \i l П kUala 13 L 4. Коэффициент усиления Коэффициент усиления это замер усиления, применяемого для сигнала. В проточной цитометрии это происходит в период между первоначальным обнаружением светового импульса и оконча тельным выводом, что хранится в памяти в виде канала, на аналогово-цифровом преобразо вателе. Для слабого светового импульса, коэффициент усиления может увеличиваться за счет использования усилителя, увеличивающего электрический сигнала после того, как он выходит из фотодетектора, или он может увеличиваться путем изменения напряжения непосредственно на фотоумножителе (Для практической информации см. также главу “Коэффициент усиления”). 5. Зоны и затворы Зоны наносятся для определения определенной клеточной популяции. На гистограмме 1-Parameter это выполняется путем настройки диапазона (Range) а на точечном плане 2-Parameter использу ется многоугольник (Для практической информации см. также главу „Зоны"). Затвор представляет собой ограничение, устанавливаемое на проточно-цитометрических данных, которые будут вклю чены в последующий анализ. 6. Флуоресцентное окрашивание Для дальнейшего описания клеток, они часто отмеченные флуоресцентного маркера. Лейкоциты могут быть обнаруживаться в субпопуляциях благодаря CD-маркерам (CD: дифференцировоч- ный кластер). Для этого используются определенные антитела, которые распознают конкретный эпитоп на интересующие клетки. Вследствие связи между антителами и конкретным флуорес центным красителем (например, R-PE: фикоэритрин) клетка, которая несет в себе антитело на своей поверхности, излучает оранжевый флуоресцентный свет после возбуждения лазером 532 нм. Этот флуоресцентный свет обнаруживается в канале FL2 счетчика CyFlow ®, и назначается для определенной клетки. --- стр. 7 --- Действительный объемный абсолютный счет Определение количества клеток или субпопуляции клеток, также называемое Абсолютным счетом, может представлять значительный интерес для медицинской диагностики или мониторинга состоя ния клеток в клеточных культурах или биотехнологических процессах. Традиционные приточно-цитометрические методики для абсолютного счета 1. Методика сдвоенной платформы Для определения количества клеток на мл, проточные цитометры (FCM) часто используются вместе с гематологическими анализаторами. Умножив результат процентного содержания клеток от FCM на результат подсчета от гематологического счетчика, можно определить концентрацию любой клеточной субпопуляции. Очевидно, что этот метод полагается на то предположение, что число клеток, видимых проточным цитометром (FCM) и считываемых гематологическим анализа тором, является идентичным. 2. Методика одиночной платформы с эталонными бусинами Еще один способ анализа концентрации клеток с одним проточным цитометром (FCM) заключает ся в добавлении микро-бусин с “известным” номером или концентрацией в клеточную суспензию. Посредством сравнения количества клеток с количеством бусин, можно рассчитать концентра цию клеток. Еще одна вариация этого метода использует бусины “известной” концентрации для повторной калибровки жидкостной системы время от времени. Этот метод, однако, зависит от точности указанной концентрации бусин. 3. Действительный объемный абсолютный счет (TVAC) прибора Partec Для преодоления препятствий методики сдвоенной и традиционной одиночной платформы, при боры Partec предлагают альтернативный способ абсолютного счета клеток, который основывает ся непосредственно на базовом определении концентрации с с = N / V по точному расчету числа N клеток, подвешенных в чисто механически определенном объеме V. a. Точный счет: определение N Для точного действительного объемного счета, точный подсчет количества N клеток, имеет важное значение. Он требует быстрого распознавания и анализа событий, как электроникой, так и компьютером. Все приборы Partec специально предназначены для минимизации под счета убытков, обеспечивая непосредственную связь между компьютером и электроникой, что позволяет избежать время запаздывания, имеющее место в традиционной конструкции проточных цитометров (FCM) и интерфейсах приборов. Системы Partec могут обрабатывать события с частотой до 15000 событий в секунду. Это уменьшает вероятность потери подсчета при частоте событий ниже 2%. b . Принцип электрода: определение V Метод действительного объемного абсолютного счета, поддерживаемый счетчиком CyFlow®, основывеатся на точном измерении фиксированного контрольного объема с помощью двух электродов. --- стр. 8 --- Во время анализа проточным цитометром (FCM), в определенное время образец отключается от верхних электродов, создавая тем самым цифровой сигнал ПУСК для подсчета. Отключение от ниж них электродов вырабатывает сигнал СТОП. Объем V в образце, анализируемый между сигналами ПУСК и СТОП, физически определяется расстоянием между двумя электродами и диаметром про боотборной трубки. Действие мениска образца в трубке, отключаемое от электродов только через определенное время после прохождения уровня образца, устраняется: оно происходит для состояния ПУСК и СТОП аналогичным образом, так как электроды ПУСК и СТОП, расположены симметрично. Проводимость образца не влияет на меру объема до тех пор, пока жидкость может обнаруживаться электрически. В некоторых случаях, большие или меньшие объемы подсчета V являются предпочтительными, либо для улучшения статистики подсчета (например, для редких событий < 10/ml), или для уменьшения времени анализа. Это может достигаться путем замены стандартного 200 рл порта для объемного образца другим с отличительным объемом. Принцип действительного объемного абсолютного счота прибора Par tec --- стр. 9 --- Эксплуатация Процедура ежедневного запуска 1. ЗАЩИТНАЯ и СТОЧНАЯ пробирки Убедиться, что защитная пробирка заполнена жидкой оболочкой (код Partec No. 04-4007), а синяя резьбовая крышка плотно закрыта. Наклонить защитную пробирку для того, чтобы выпустить пузырьки воздуха, захваченные под белым встроенным фильтрующим элементом. Сточная про бирка должна быть пустой, а красная крышка плотно закрыта. Примечание: При слабых настройках технических средств, компания Partec рекомендует ис пользование производственного комплекта жидкой оболочки (код Partec No. 04-4020) для при готовления доброкачественной жидкой оболочки. 2. Включение прибора Счетчик CyFlow® работает от источника питания 240 В постоянного тока. Включить питание на задней стенке прибора, а затем нажать зеленую кнопку слева от логотипа Partec, расположенного спереди. 3. Комплектация программным обеспечением CyView Программное обеспечение CyView запускается автоматически после загрузки компьютера. Затем следует выбрать Config-Script и Measure-Script (см: Выполнение замера) для различных анализов (анализ с зелеными бусинами для проверки подсчета, CD4 или CD4%). a. Загрузить Config-Script: Scripts Load Config-Script -» CountCheckBeadsGreen b. Соответствующий раздел замера Measure-Script выбирается автоматически. 4. Очистка Вставить пробоотборную трубку с 1.6 мл Очищающего раствора (код Partec No. 04-4009) в про боотборный порт. Нажать кнопку Start для выполнения замера. Подождать, пока процедура за мера и последовательной очистки не завершится автоматически. Повторить это с 1.6 мл Жидкой оболочки (код Partec No. 04-4007) для удаления остатков Очи щающего раствора. 5. Контроль качества Вставить пробоотборную трубку с 850 рл Зелеными бусинами для проверки подсчета (код Partec No. 05-4011) в пробоотборный порт и нажать кнопку Start для выполнения замера. Подождать, пока процедура замера и последовательной очистки не завершится автоматически. Данные со храняются в памяти и распечатываются по запросу. --- стр. 10 --- Результат замера с Зелеными бусинами для проверки подсчета указывается в ячейке Results. Сравнить со специальным номером партии, указанным на пробирке и проверить, находится ли результат подсчета ALL_1 в пределах 10% диапазона. Если да, то тогда счетчик CyFlow Counter® готов для дальнейшего анализа. Если нет, то тщательно встряхнуть пробирку и повторить замер (см. также главу: Устранение неисправностей). --- стр. 11 --- Выполнение замера 1. Проверить, что Счетчик CyFlow® готов к замеру (см. главу: Процедура ежедневного запуска). 2. Для абсолютного счета CD4 (счет CD4%) подкрасить пробу крови комплектом легкого счета CD4 (комплект легкого счета CD4%), как указано в спецификации. 3. Загрузить соответствующую функцию Config-Script для CD4 абсолютного (CD4%) замера, кото рая содержит соответствующую гистограмму и точечный план расположения для анализа. a. Загрузить функцию Config-Script: Scripts Load Config-Script -» CD4 (С04процент) b. Соответствующая функция Measure-Script выбирается автоматически. CD4 С04процент ... v.u.» и C.IM S.M 1 ш ' LY* " :ГИ* il.VH /||| V» 1 1...'.- * .а 4. Подсоединить пробоотборную трубку к пробоотборному порту. a. Щелкнуть кнопку START для выполнения замера. Прибор выполнит определенные про цессы, которые представлены в нижней части экрана: i. PRERUN :Создает временный, быстрый поток образцов ii. RUN :Частицы замеряются и классифицируются Ш. MEASURE Определенный объем замеряется и подсчитывается b. При необходимости, прежде всего, отрегулировать пиковое значение положения Т-клетки CD4 на гистограмме (пиковое положение CD45) при помощи строки GAIN. Затем прове рить нижний порог уровня для отключения нежелательных фоновых сигналов с левой сто роны гистограммы, если это необходимо. Однако, не отключать интересуемое основное пиковое значение. Просьба обращаться к рисункам ниже. 5. Во время режима COUNT, указанного на правой зеленой строке состояния, не изменять скорость, коэффициент усиления, пусковую систему или другие параметры программного обеспечения. 6. Подождать, пока замер и последовательная процедура очистки не прекратятся автоматически. Во время этого процесса справа указывается символ FLUSH). 7. При необходимости, настроить зону на отметку интересуемой популяции клеток или частиц (см. раздел: Зоны). 8. Ввести или изменить имя пациента. 9. Затем сохранить (см. главу: Сохранение) или распечатать (см. главу: Распечатка) результат. --- стр. 12 --- CD4 С04процент 10. Результат замера отображается в окошках “Regions” и “Results”. В окошке “Regions” отображается абсолютное число указанной клеточной популяции - анализируемой в 200 рл объеме подсчета. Окошко “Results” показывает концентрацию соответствующей клеточной популяции в пределах оригинального объема крови. Процедура ежедневного останова Проточные цитометры представляют собой сложные, но надежные приборы, которые могут очищать ся и дезинфицироваться несколькими несложными этапами. Для этой процедуры используются Очи щающий и Дезинфицирующий растворы Partec. Следующие этапы должны выполняться в конце каждого дня использования прибора: 1. Вставить пробоотборную трубку с 1.6 мл Дезинфицирующего раствора в пробоотборный порт и нажать кнопку START. Выполнить прогонку в течение 15 секунд и сдавить трубку с жидкой оболочкой. Остановить прибор нажатием кнопки STOP, отпустить сдавленную трубку и выдержать в течение 15 минут. Выполнить повторный запуск системы нажатием кнопки START и подождать, пока замер и последовательная процедура очистки не прекратятся ав томатически. 2. Повторить процедуру с 1.6 мл Очищающего раствора без сдавливания трубки и выдержи вания. 3. Вставить пробоотборную трубку с 1.6 мл жидкой оболочки в пробоотборный порт и нажать кнопку START. Через 2 минуты замера нажать кнопку STOP и удерживать пробоотборную трубку с жидкой оболочкой подсоединенной к пробоотборному порту. 4. Выключить прибор. --- стр. 13 --- Подробное описание программного обеспечения: CyView Меню программного обеспечения В следующей главе дается обзор функций параметров программного обеспечения. ггж)!яиж.1». || 11,-[ 1 hi |ИНМН|ИИМ|||М11И11И|!11 Retoad! Scripts Help Language Заголовок содержит информацию о названии и версии программы, названии графики Config- i Measure-Script, состоянии программного обеспечения и выбранном языке. В выпадающем меню имеются следующие опции: Reload!: Загрузить сохраненный замер Scripts: Help: Загрузить Config-Script: Сохранить Config-Script: Загрузить Measure-Script: Запустить очистку: Компоновка может быть загружена Компоновка может быть сохранена Настройка параметров может быть загружена Может быть начат цикл автоматической очистки Программная помощь: Можно открыть программную помощь Информация о ОЕМР: Показывает номер версии программ, обеспечения Language: Можно выбрать языковое меню (английский или немецкий) Щелчком по соответствующей кнопке с левой стороны дисплея можно выбирать и изменять следую щие параметры или функции, находящиеся в активном состоянии: Изменение порогового уровня параметра пускового устройства. (L-L) Вставить/изме- нить имя пациента(пациент) Изменение настроек потока образцов (скорость) CD 4 Изменение параметров в пределах SSC, CD4 и CD45, щелкнув несколько разданную кнопку. Изменение повышенного напряжения выбранного параметра (коэффициент усиления) Сохранение замера в качестве данных FCS. Распечатка замера в качестве отчета. Щелчком по одной из указанных выше кнопок открывается строка состояния на правой стороне дис плея, которая может использоваться для изменения активного параметра. --- стр. 14 --- Speed L-L: Установка порогового уровня параметра пускового устройства путем выбора значения от 0 до 0.7. Patient: Изменение имени пациента. Данную функцию может найти нажатием кнопки L-L. Speed: Изменение скорости потока образцов от 0.2 до 20 рл/с. Gain: Изменение величины коэффициента усиления выб ранного параметра (SSC, CD4, CD45), который являет ся высоким напряжением фотоумножителя (РМТ); величина от 0 до 1000. После щелчка по окошку расположения можно выбирать следующие опции путем нажатия несколько раз верхней кнопки справа на дисплее: LogX No Part LogX: Переключение масштабирования между Log.- и Lin.- (гистограмма и ось х точечного плана) LogY: Переключение масштабирования между Log.- и Lin.- (ось у точечного плана) Base: Изменение уровня z точечного плана; величина 1-10. Const: Применение уровня z величины 0 или 1 для точечного плана. Щелчком по одной и зон активируются следующие функции: Del New DEL: Удавление зоны, если она не используется для отобра жения результата NEW: Создание новой зоны, выбор имени, цвета зоны и контрольных точек --- стр. 15 --- Bottles ннянвнннянннннин ш PatientID: PATIENT ■SamplelD : 43 (ms) >CD4 1. fcsFluids SenriiHirig 7j|in complete? 0 kDatn 8 Level START: Запуск замера, когда прикреплен образец. BREAK: Прерывание замера, который не может продолжаться далее STOP: Остановка замера BOTTLES/LEVEL: Показывает уровень заполнения содержимым пробирок (жидкая оболочка/ отходы) и пробоотборной трубки. Красный цвет указывает на почти пустую пробирку с жидкой оболочкой или почти полную пробирку с отходами. FLUIDS: Показывает по очереди количество жидкой оболочки (рл/сек) и пробной жидкости (частиц/сек) KDATA: Показывает объем памяти и удаляет гистограмму LEVEL: Зеленый цвет указывает на заполненное количество образца, а красный цвет указывает на отсутствие образца. Мигание зеленого/красного цвета указывает на то, что образец находится между двумя электродами. В окошке расположения показаны различные гистограммы и точечные планы, в зависимости от ис пользования конфигурации ConfigScript. --- стр. 16 --- Сенсорная панель Счетчик CyView оптимизирован для использования сенсорной панели с указателем. Как вариант можно также использовать мышь. Большинство входов могут распознаваться сенсорной панелью и клавиатурой с программным обеспечением. Возможен “двойной щелчок”. Клавиатура Доступ к входам для клавиатуры с программным обеспечением осуществляется нажатием кнопки ENTER, а затем клавиатура автоматически закрывается. Ш Bildschirmtastatur Datei Tastatur Emstellungen ? Внешняя мышь и клавиатура Как вариант попеременно использовать внешнюю мышь и клавиатуру. --- стр. 17 --- Функции программного обеспечения Config-Script Функция Config-Script определяет местоположение, которое включает в себя номер, ярлык и ото бражение гистограммы, точечных планов, зон и окна результатов. Функции Config-Scripts хранятся в папке Config-Folder и должны загружаться перед началом замера: Scripts -» Load Config-Script-» CountCheckBeadsGreen (CD4, CD4percent) Для каждого замера выбирается соответствующая функция Config-Script: Замер Контроль качества CD4 абсолютный CD4% и абсолютный Комплект реагентов Проверка зелеными бусинами CD4 комплект удобного счета CD4% комплект удобного счета Функция Config-Script CountCheckBeadsGreen CD4 CD4percent CountCheckBeadsGreen CD4 CD4percent Measure-Script Функция Measure-Script содержит настройки по умолчанию для параметра пускового устройства, ве личин коэффициента усиления, скорости и зон. Она загружается автоматически с соответствующей функцией Config-Script и может изменяться до или во время замера. Regions Функция Regions отделяет область частиц (кластер) от плана. Зона, принадлежащая гистограмме, имеет две границы (линии); одна, принадлежащая точечному плану, может иметь от 3 до 20 точек (многоугольник). Зона может создаваться/удаляться во время или после замера. Следующие зоны предопределены для каждого замера и могут регулироваться, но не удаляться: Замер Контроль качества CD4 абсолютный CD4% и абсолютный Комплект реагентов Проверка зелеными бусинами CD4 комплект удобного счета CD4% комплект удобного счета Предопределенные зоны ALL_0, ALL_1, ALL_2 CD4 CD4, LYM --- стр. 18 --- Многоугольник Как добавлять или изменять зону: Изменение уже установленной зоны: 1. Щелкнуть кнопку REGIONS, пока не будет выбрана зона, подлежащая изменению 2. Щелкнуть DO IT! 3. Нарисовать новую зону в пределах плана (гистограмма/точечный план) a. Гистограмма: Сначала установить левую линию, а затем правую линию зоны b . Точечный план: Щелкнуть по каждой угловой точке для создания многоугольника вокруг популяции сигналов. Допускается максимум 20 точек. 5. Щелкнуть DO IT! Новая зона установлена. Создание новой зоны 1. Щелкнуть REGION 2. Щелкнуть DEL. Появится окно NEW. Щелкнуть DO IT! 3. Выбрать название. Вы можете сделать это при помощи программной клавиатуры. Также можно выбрать цвет. Щелкнуть NEXT 4. Нарисовать зону в пределах плана (гистограмма/точечный план) a. Гистограмма: Сначала установить левую линию, а затем правую линию зоны. b. Точечный план: Щелкнуть по каждой угловой точке для создания многоугольника вокруг популяции сигналов. Допускается максимум 20 точек. 5. Щелкнуть NEXT. Новая зона установлена. Пусковое устройство/L-L Параметр пускового устройства для каждого замера сохраняется в памяти функции Measure-Script и не может изменяться. Замер Контроль качества CD4 абсолютный CD4% и абсолютный Комплект реагентов Проверка зелеными бусинами CD4 комплект удобного счета CD4% комплект удобного счета Параметр пускового устройства CD4 (FL2, оранжевое свечение) CD4 (FL2, оранжевое свечение) CD45 (FL3, красное свечение) Для точного замера может потребоваться настройка значения по умолчанию L-L, которое является пороговым уровнем параметра пускового устройства. --- стр. 19 --- llotuly L-L Открыть программу LL-tool, щелкнув кнопку L-L/Patient слева на дисплее. Изменить величину L-L, переместив панель вверх или вниз. Выбранная величина в пределах 0-0.7 отобразится в левом зе леном поле. Коэффициент усиления Величиной коэффициента усиления является высокое напряжение HV трубки фотоумножителя и описывает усиление сигнала каждой замеряемой частицы. Величина может устанавливаться в пре делах от 0 до 999. Увеличение усиления сдвигает сигналы/пиковые значения вправо, а уменьшения сдвигает их влево. Сигналы/пиковые величины могут оптимизироваться коэффициентом усиления на гистограмме/точечном плане. < Р««octet Scrips аф language Л ‘ 0)4 V" d •ли- Я I ё 7 1 ......... 1 1 RESULTS CD4 H50 /\l\ I Коэффициент яяшшшшш усиления л Unities Fluid г. Pati.entID: nc-Nsmc •TimplnXD : OIC 3) U.ocelA. ;CM. t re Выбрать параметр (SSC, CD4, CD45), для которого вы бы хотели изменить величину коэффициента усиления, щелкнув среднюю левую кнопку, пока не появится название нужного параметра. Затем изменить величину коэффициента усиления передвижением панели вверх и вниз. Величина в преде лах от 0 до 999 отобразится в левом зеленом поле. Скорость образца При помощи функции Speed скорость образца может регулироваться от 0.2 до 20 рл/сек. Низкая/вы- сокая скорость образца вызывает повышенную/пониженную точность, но также увеличивает/умень- шает время, необходимое для замера. Для стандартного замера, например, проверка подсчета зеле ными бусинами, CD4 абсолютный и CD4%, скорость по умолчанию составляет 3 рл/сек. --- стр. 20 --- Ш К Н рщл ♦nt.T.r: г.оК*а.*- в«»|.1-*ТГ : 03.£ ТЗ <boc«lAirain) С04. Сев .„v О klJnln 4 I »v«l Скорость Для изменения скорости образца, активировать параметр путем нажатия кнопки pl/s слева. Затем изменить величину Speed путем передвижения панели вверх и вниз. Величина в пределах от 0.2 до 20 цл/сек отобразится в левом зеленом поле. Сохранение Замер сохраняется по запросу путем нажатия кнопки FCS. Название файла по умолчанию: <patient>_<date>_<time>. Распечатка Гистограммы и точечные планы наряду с результатами распечатываются по запросу посредством нажатия кнопки Print. --- стр. 21 --- Устранение неисправностей Что делать, если... 1. Результат замера при помощи зеленых бусин для проверки подсчета находится за пределами диапазона 10% от указанной на пробирке особой концентрации партии. • Энергично встряхнуть пробирку и повторить замер. • Выполнить процедуру необходимой очистки. 2. Во время анализа жидкая оболочка течет обратно в пробоотборную трубку. ■ Пробоотборная трубка не прикреплена надлежащим образом к пробоотборному порту. Убедиться в том, что слышен “щелчок”, когда вы вставляете пробоотборную трубку в про боотборный порт. Повторить замер с новым образцом. • Пробоотборная трубка треснута. Повторить замер с новым образцом. • Заменить уплотнение на пробоотборном порте BioSafety. 3. Поток образцов очень медленный или не проходит. Подсчет иногда занимает до 5 минут даже при высокой скорости. • Проточная кювета загрязнена и частично забита. Выполнить процедуру необходимой очистки. • Заменить уплотнение на пробоотборном порте BioSafety. • Проверить, чтобы сточная пробирка, была надлежащим образом закрыта, и чтобы про бирка не была треснута. 4. Образец не запускается автоматически. • Тщательно очистить два электрода пробоотборного порта, протерев их мягкой тканью, смоченной в Дезинфицирующем растворе. 5. Гистограмма/точечный план не видны во время стадии прогонки • Проверить, правильно ли вы загрузили ConfigScript для вашего замера. • Увеличить скорость. Если это работает, то вы должны выполнить процедуру необходимой очистки. • Проверить, функционирует ли лазер. Осторожно открыть крышку прибора и проверить, видим ли зеленый свет лазера. Просьба обращаться к главе: Безопасность при работе с лазерами 6. Не имеется должного разделения между особым пиковым/клеточным кластером и фоновыми сиг налами. • Заменить жидкую оболочку. • Проверить Счетчик CyFlow® при помощи зеленых бусин на предмет точности подсчета. • Повторить анализ (ЭДТА крови от здорового донора). • Change inline filter of Sheath bottle. 7. Пиковые величины очень грубые и разделение между пиковыми величинами/клеточными класте рами неудовлетворительное. • Проверить образец крови (система взятия крови, хранение, процедура приготовления). • Проверить наличие воздушных пузырьков внутри проточной кюветы. Необходимая очистка проточной кюветы Просьба выполнить следующие стадии: 1. Вставить пробоотборную трубку с 1.6 мл Гипохлоритного раствора в пробоотборный порт и на жать кнопку START. Выполнить прогон в течение 15 секунд и сдавить трубку с жидкой оболочкой. Прекратить замер нажатием кнопки STOP, отпустить сжимаемую трубку и выдержать ее в тече ние 15 минут. Выполнить повторный запуск системы нажатием кнопки START и подождать, пока замер и процедура последующей очистки не прекратятся автоматически. 2. Повторить с трубкой с 1.6 мл Дезинфекционного раствора. Время выдержки также может увели чиваться. 3. Вставить лробоотборную трубку с 1.6 мл Жидкой оболочки в пробоотборный порт и нажать кнопку START. Подождать, пока замер и процедура последующей очистки не прекратятся автоматически. 4. Выполнить замер с зелеными бусинами для проверки подсчета с целью проверки работы счетчи ка CyFlow®. --- стр. 24 --- Безопасность при работе с лазерами Счетчик CyFlow® представляет собой лазерный продукт класса I в соответствии со стандартол EN 60825-1. Предупреждение: Лазерный свет может излучаться, если защитная крышка для лазерного луча снята, и открыт затвор луча. Потому система маркируется следующими знаками безопасности для работы с лазерами: Предупреждение: лазерное излучение --- стр. 25 --- Руководство по эксплуатации счетчика CyFlow® Счетчик CyFlow® - Технические условия Примечание: Вследствие быстрого усовершенствования техники, приведенные в данном документе спецификации подлежат изменению. Для поставщику. 1. Система счетчика CyFlow® Размер Масса Макс, уровень акустической мощности Категория установки/перенапряжения Степень защиты Рабочая среда Области применения Действительный объемный абсолютный счет (TVAC) Приборная проверка Время настройки Параметры Градация размеров частиц Мах. скорость получения Время остановки получения Пусковое устройство Разрешение данных Графическое разрешение Сервис Гарантия 2. CyFlow® Counter Optics J Лaзep/Moщнocть подробной информации, просьба обращаться к Вашему Ш 325 мм х В 330 мм х Д 265 мм 11.5 кг < 70 дБА 2/II IP 20 Температура 15-30°С Влажность 20-85% относительная (без конденсата) Помещение Чистое. Избегать прямых солнечных лучей. Мониторинг больных СПИДОМ/ВИЧ, Иммунофенотипи- рование, 2-цветный анализ и определение концентрации частиц при помощи TVAC. Действительный объемный абсолютный счет. Основан на точном подсчете и механическом замере жидкого объема. Нет необходимости в контрольном образце или контрольных бусинах. Проверка счета зелеными бусинами (код Partec No. 05-4011) Макс. 5 минут 3 оптических параметра: SSC, FL2, FL3 0.5 - 50 рм (стандартная кювета) 15,000 событий/сек В зависимости от объема FL2 (CD4 счет) FL3 (CD4 %) 65,536 (16 бит) 256-канальное разрешение для гистограммы 1Р 256/256-канальное разрешение для точечного плана 2Р Просьба обращаться к местному поставщику или фирме Partec 12 месяцев для всех деталей кроме фильтров, зеркал, прочих деталей из стекла и кварца, элементов одноразо вого использования и кювет, если иное не указано Зеленый NdYAG: 30 мВт at 532 нм 3 (SSC, FL2, FL3) 25/26 --- стр. 26 --- Фильтры Стандартные настройки и фильтры для SSC, FL2 и FL3 Оптика возбуждения Овальная 15 рм х 100 рм при 488 нм 3. Струйная техника CvFlow® Проточная кювета Подача образца Объем пробоотбора Расход Флюидный объем Синтетическая кварцевая проточная кювета с перифери ческим каналом потока (350 х 200 рм) для транспорти ровки пластинчатого образца с жидкой оболочкой для определения рассеянного и флуоресцентного света. Точный шприцевой насос, контролируемый компьютером для транспортировки стерильного образца. Встроенный вакуумный насос (400 мбар) для транспортировки жид кой оболочки и образца. Непрерывный до 2000 |_ш Минимум 840 рл для действительного объемного абсо лютного счета (TVAC) Постоянно регулируемая скорость контрольного объема в пределах от 0.2 до 20 рл/сек Стеклянная пробирка 2 х 1л (во взрывозащищенном исполнении) для жидкой оболочки и отходов 4. Электроника и компьютер счетчика CvFlow® Электроника Компьютер Обработка сигнала Усилители 16-битный АЦП Пусковое устройство Встроенный компьютер Процессор Intel Celeron 8.4-дюймовый цветной сенсорный экран (SVGA) Клавиатура(дополнительно) Мышь (дополнительно) Принтер (встроенный) 5. ПО CvView ПО Программное обеспечение Комплектация развертки Развертка ConfigScript MeasureScript Отчет Windows™ Стандартный формат списочного режима FCS 2.0 Сопровождение в реальном времени Отчет (автоматический расчет) Нижние пороговые величины уровня аппаратного обес печения для параметров запуска событий, регулируемые ПО Зона (до 20 точек) Диапазон Онлайновая и офлайновая развертка, хранимая в памяти развертка с функцией ConfigScript Сохраняет местоположение замера Сохраняет коэффициент усиления, скорость и т.д. в качестве величин поумолчанию. Загружается при помощи соответствующей функции ConfigScript Автоматический расчет CD4 и CD4% --- стр. 27 --- спосо измер спосо ускор оптик оптич испол вмест< --- стр. 28 --- СПРАВКА О МЕДИЦИНСКОМ ИЗДЕЛИИ «Система диагностическая проточной цитометрии CyFlow Counter» с принадлежностями (далее система) производства «Partec GmbH», Германия. Система предназначена для контроля иммунного состояния больных. Система предлагает возможность абсолютного счета положительных Т-клеток CD4 (CD4+), определения Т-клеток СЕ среди лимфоцитов (CD4%) и абсолютных величин Т-клеток CD3+ и CD8+. Определение процентного содержания CD4 согласно Всемирной Организации Здравоохранения (WHO) являет клинически соотнесенным параметром для определения возникновения высокоактивной антиретровирусной терапии у детей. Система оборудована зеленым (532 нм) твердотельным лазе] и тремя оптическими параметрами для обнаружения бокового рассеивания (SSC), оранжевыми (F и красными (FL3) флуоресцентными сигналами. Принадлежности: USB хаб (USB Hub). Блок питания с кабелем (Power Supply + Cable). Бумага для термопринтера (Thermo printer paper 5 rolls) 5 шт. Бутылки для ламинарной жидкости и отходов (Sheath and waste bottle) 2шт. Бутылки с узким горлом, 125 мл. (125 ml narrow mouth bottle) 5шт. Входной фильтр для бутылки с ламинарной жидкостью (Inline filter for sheath container). Кабель RS232 (RS232 Cable). Кабель питания (Power supply cable). Карандаш для сенсорного экрана (Pen for touchscreen color monitor). Клавиатура (Keyboard). Мышь (Mouse). Набор инструментов (Service tools set). Набор прокладок для держателя образца (Sealing set for sample port) 5 шт. Набор сменных трубок для проточной кюветы и контейнеров для слива ламинарной жидкости (Tubing replacement sets for flow cuvette and sheath/waste container) 2шт. Станция пробоподготовки (Autopreparationstation). Штатив (Tray). Класс потенциального риска 2а по ГОСТ Р 51609 - 2000. Технические характеристики. Размер Ш 325 мм х В 330 мм х Д 265 мм Масса 11.5 кг Макс, уровень акустической мощности < 70 дБА Категория установки/перенапряжения 2/П Степень защиты IP 20 Источник питания 100/240 В пер.тока. Автономный аккумулятор / Солнечная батарея 12 В постоянного тока (только в сочетании с преобразователем напряжения). Время выхода на рабочий режим до 5 мин. Размер экрана встроенного цветного дисплея 8,4 дюйма. Система не нуждается в предварительной калибровке объема исследуемой пробы косвенш лособом специальными дорогостоящими микрочастицами. Истинный объем пробы точно смеряется непосредственно в процессе проточной цитометрии прямым электронно-механически лособом. Эта эксклюзивная особенность проточных цитометров CyFlow существенно упрощает, «жоряет и удешевляет цитофлюориметрические анализы. Внутренний дизайн системы удачно сочетает компактность с расположением всех основ] штико-электронных устройств на единой высокостабильной металлической шине. При этом штический сигнал (световой, флуоресцентный) прямо попадает в соответствующие детекторы бе кпользования оптико-волоконных проводников, что исключает потери оптической энергии и, месте с эксклюзивной оптикой фотодетекторов, существенно повышает чувствительность прибо --- стр. 29 --- (>100 у. е. по ФИТЦ и 50 у.е. по РЕ) - максимальную на сегодняшний день. Наряду с компактностью, внутренний дизайн настольных моделей позволяет существе; расширения стандартной конфигурации (1-2 лазера, 6 детектируемых оптических параметров: прямое и боковое светорассевание, 4 флуоресцентных цвета), как базовая стандартная модель, \ дополняться встроенным прецизионным электронным сортировщиком клеток и частиц. Кроме i настольная модель по умолчанию снабжена встроенными видеокамерами с выходом на общий монитор для визуального контроля проточной цитометрии при необходимости. Подготовка образцов к анализу сведена к минимуму: внесение флуоресцентного pear в микрообъем исследуемой цельной крови или другой клеточно-тканевой суспензии, инкубация комнатной температуре 20 минут - и можно приступать к проточно-цитометрическому анализу, большом количестве образцов настольные модели могут подключаться к внешним автоматичесь устройствам для подготовки и автоматической подачи образцов в проточный цитометр.. Ворошилов Н.А.