Цитофлуориметр проточный для клинической лабораторной диагностики in vitro BD FACSCanto II с принадлежностями — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 ---
«УТВЕРЖДАЮ»
П р о т о ч н ы й ц и т о ф л ю о р и м е т р д л я
к л и н и ч е с к о й л а б о р а т о р н о й д и а г н о с т и к и
B D F A C S C a n t o I I
производства компании Becton Dickinson, США
Р у к о в о д с т в о п о л ь з о в а т е л я
--- стр. 2 ---
Система BD FACSCanto II устанавливает новый стандарт простоты, гибкости и допустимости в
проточной цитометрии. С его устройством фиксированной оптики и цифровой электроникой,
проточный цитофлуориметр BD FACSCanto II позволяет многокрасочный анализ до шести
флуоресцентных маркеров и двух параметров светорассеивания одновременно.
Вы не нуждаетесь ни в каких специальных средствах; прибор работает от стандартной стенной
розетки, использует лазеры с воздушным охлаждением, и обеспечивает его сам давлением
воздуха и вакуумом для жидкостей и слива. Вы можете подготовить образцы на BD FACS” ^*^
Sample PrepAssistant и импортировать рабочие листы. Для дальнейшей автоматизации Вы
можете использовать BD FACS Loader для сбора образцов.
Эта глава содержит эти темы:
• системные компоненты
• системные требования.
Системные Компоненты
Система BD FACSCanto II состоит из трех главных компонентов: настольный проточный
цитофлуориметр, изолированная стойка с растворами и рабочая станция BD FACSCanto II (см.
рис. 1-1). Дополнительная автоматизированная опция загрузки образца также доступна.
рис. 1-1 система BD FACSCanto II
В в е д е н и е
[ -
J [
0 .1
«1
Для описания системных компонентов, см. следующие разделы.
• Проточный цитофлуориметр
• Стойка с растворами
• Рабочая станция
• Загрузчик (Дополнительный)
Проточный цитофлуориметр
За исключением кнопки включения, Вы можете управлять проточным цитофлуориметром и
функциями стойки с растворами из программного обеспечения BD FACSDiva.
--- стр. 3 ---
р(МИ button
flu ld c s c a rt
tijfiiieclions
Проточный цитофлуориметр BD FACSCanto II состоит из подсистемы оптики, жидкостной
подсистемы и подсистемы электроники. Для более всестороннего обсуждения жидкостной
системы, оптики, электроники и проточной цитометрии см. Технический обзор.
Жидкостная система
Жидкостная система состоит из пробирки подачи образца (SIT), плеча аспиратора, проточной
кюветы, внутреннего резервуара под давлением и сетью трубок, которые обеспечивает
проточной и промывочной жидкостями и удаляет слив из проточной кюветы.
Рис. 1-2 Пробирка подачи образца
■ tu U m
tut» a u lik ’• L o a d w o p tto n c n k i
asplratcc arm bai
Следующая таблица кратко описывает эти компоненты.
проточная кювета где лазерный луч пересекает частицы
линии трубки проточной и промывочной
жидкостей, а также слива к и от
проточной кюветы
SIT полая металлическая труба, которая
--- стр. 12 ---
Д л я п о л у ч е н и я то ч н ы х результатов д а н н ы х , в о с ь м и у го л ь н ы е и тр е у го л ь н ы е н аб ор ы д о л ж н ы
соответствовать те ку щ е й ко н ф и гу р а ц и и прибора.
2 П роверьте, ч то ф ильтры с о о тв е тс тв у ю т и м о ж н о и спо л ьзо ва ть ф л уо р о хр о м ы F IT C . Р Е , Р егС Р -
С у5 .5, Р Е -С у7 , А Р С и А Р С -С у 7 .
Заданная по у м о л ч а н и ю ко н ф и гу р а ц и я ф ильтров п о д х о д и т для 6 -т и ц в е тн о го анализа.
3 В ы б е р и те E d it > U ser P references (Р е д актирование > П р е д п о ч те н и е пользователя) и п ровер ьте,
что в ы б ра н ы с л е д ую щ и е значения.
' Т | й » - '! в « г Л ;
a c o i i s t » » » a f t t jo f i» !
V « « r a w » > n ? j T g r « « r / e r M m r M f
« « J i m s £ ie jijij6 n jn » ( « 7 n i n t * a t « i :
» • S * * * « r t s »
v u iu n u lr tfr IM O ) I f c if n t H t n t i >
Д л я п о л н о го о б с у ж д е н и я П р е д п о ч те н и й пользователя, об ра ти тесь к Р у ко в о д с тв у пользователя
B D F A C S D iv a .
С о зд а н и е Э к с п е р и м е н т а
Э то т раздел описы вает, к а к создать п а п к у и Э ксп е р и м е н т, о пре д ел и ть п а р а м е тр ы и ссл ед ования
и д о б а ви ть п р о б и р к и ко м п е н с а ц и и ,
1 Н а ж м и те с о о тв е тс тв у ю щ и е к н о п к и и н с т р у м е н то в панел и W o rkspa ce, ч то б ы о то б р ази ть
B ro w se r, In s tru m e n t (П р и б о р ), In s p e c to r (И н с п е к т о р ), W orksheet (Р а б о ч и й л и с т) и A c q u is itio n
C o n tro ls fram e s (Р а м ки ко н тр о л я сб о ра ), если необход им о.
С о в е т П о с к о л ь к у В ы работаете с п р о гр а м м н ы м о б есп ечени е м , р а м к и м о гу т скр ы ть с я . В ы
м ож ете л е гко в ы д в и н у т ь р а м ку на п е р в ы й пл ан, д в а ж д ы щ е л кн у в с о о т в е т с т в у ю щ у ю к н о п к у
и н с тр у м е н то в па не л и W orkspace.
2 (Н е об я зате л ьны й ) С оздайте п а п к у для ващ его Э ксп е р и м е н та .
В ы б ер и те зн а ч о к для ващ ей базы д а н н ы х в B ro w s e r и н а ж м и те кнопкл^ F o ld e r (П а п ка )
и н с тр у м е н то в па не л и B ro w se r. П е р е и м е н у й те п а п к у со о тв е тств е н н о , н а п р и м е р
Иммулофенотип.
3 В ы б ер и те зн а ч о к п а п к и (если п р и с в о е н ), и н а ж м и те к н о п к у E x p e rim e n t, ч то б ы создать н о в ы й
Э ксп ер и м ен т.
4 П е р е и м е н уй те Э кс п е р и м е н т со о тв е тств е н н о . Н а п р и м е р , и с п о л ь зу й те 6 - т и ц в е т и Э к с п и л и
ващ и и н и ц и а л ы с с о о тв е тс тв у ю щ и м р асщ и ре н и е м .
I' г , <
- ( •
it- O is a » lS n r « l
~ ем
;j Tji.- tni
5 В ы б е р и те E x p e rim e n t-le v e l in s tru m e n t se ttings (П а р а м е тр ы н а с т р о й ки п р и б о р а на стад и и
э ксп е р и м е н та ) в Brow^ser; н а ж м и те на за кл а д ку Param eters в In sp e cto r и удалите л ю б ы е
н е н у ж н ы е п а ра м е тр ы (р и с. 3 -3 ).
--- стр. 13 ---
Нажмите кнопку выбора рядом с названием (ями) параметра, чтобы выбрать строки; нажмите
кнопку Delete, чтобы удалить выбранные строки.
Рис. 3-3 Параметры для 6-ти цветной оптимизации
гэ : !£ f
! s < : ju o
^ F I T C i C D
n S C O
l > » r C P - C v 5 - 5 m
n -O ff 5 C D
fP Z ' I C O
Ж
v e a o e L O O A и
6 Выберите Instrument > Instrument Setup > Create Compensation Tubes (Создать пробирки
компенсации). Образец компенсации добавлен к Эксперименту, наряду с Неокрашенной
пробиркой Контроля и Окрашенной пробиркой Контроля для каждого параметра, который был
определен в шаге 5. Рабочие листы, содержащие соответствующие графики добавлены для
каждой пробирки компенсации.
r v s t
г о С о л у а
> Г | Г П " с C a r w o !
S - О Р £ S J iiD M u f t r t t e *
t S ) S W t jM C o W f p *
‘ 0 С й П и » !
it • ■ - o t e c i -
f Г 5 2 W i« < o C o f t » a i
7 (Необязательный) Создайте специфично меченые пробирки, если необходимо.
Специфично меченые пробирки требуются не всегда: они необходимы, когда ваш эксперимент
содержит образцы, окрашенные тем же самым флуорофором, конъюгированным с различными
антителам (метками), которые требуют разных значений компенсации. Это особенно заметно в
тандемных конъгатах из-за изменения от лота к лоту. Обратитесь к Руководству пользователя
программного обеспечения BD FACSDiva для получения дополнительной информации об этой
особенности.
Оптимизация параметров настройки прибора
Когда Вы выполнили контроль качества работы QC прибора, параметры настройки напряжения
были откорректированы, чтобы установить каждый параметр в заданном значении. Эти
параметры настройки могут не подойти для окрашенных образцов, которые Вы планируете
анализировать. Перед записью данных Вы должны скорректировать FSC, SSC и пороговые
параметры настройки; гейтировать популяции, представляющие интерес (например,
лимфоциты) и скорректировать напряжения, чтобы оптимизировать флуоресцентный сигнал.
Для этих корректировок вам необходим неокрашенный образец контроля. Важно выполнить эти
шаги по порядку, поскольку некоторые корректировки влияют на другие.
1 Установите неокрашенную пробирку контроля на проточный цитофлуориметр.
• Сместите рычаг аспиратора влево.
• Поместите пробирку в SIT и надавите, пока пробирка не встанет плотно.
• Выровняйте по центру рычаг аспиратора под пробиркой.
2 Проверьте, чтобы зеленый указатель Acquisition был перед Неокрашенной пробиркой
Контроля в Browser; нажмите Acquire.
1
/ 3
--- стр. 14 ---
Никогда не кладите на проточный цитофлуориметр тяжелые предметы; это может привезти к
изменению данных.
3 Скорректируйте напряжения FSC и SSC, чтобы соответственно отобразить свойства
светорассеивания для LWB образца (рис. 3-4).
Рис. 3-4 Скорректированные напряжения
4 Нажмите закладку Threshold (Порог) и скорректируйте FSC Threshold (Порог FSC), если
необходимо.
Установите порог, чтобы удалить большинство дебриса. не вырезая популяции лимфоцитов
(рис. 3-4). 5 Скорректируйте гейт Р 1 на рабочем листе Неокрашенного Контроля, чтобы
окружить только популяцию лимфоцитов (рис. 3-4).
Выберите гейт, нажимая на его границу. Выбрав, Вы можете переместить гейт, чтобы
передвинуть его, или переташить любой из маркеров выделения, чтобы изменить размер и
форму гейта.
6 Как только гейт откорректирован, шелкните правой кнопкой мьппи по границе гейта и
выберите Apply to Compensation Controls (Применить к контролю компенсации).
Это применит ваши изменения к гейтам Р1 на оставшихся рабочих листах компенсации.
7 Выделите все гистограммы флуоресценции на рабочем листе Неокрашенного Контроля.
8 В Plot Inspector (Графический инспектор) выберите переключатель Show Grid (Показать сетк\ )
(рис. 3-5).
Рис. 3-5 Plot Inspector для графиков флуоресции
!ЗГТй!!!ДИИИИИИ1
T i » « f Н ( У о ? » а т |
ш
c h e c k Ь а >
T u tf
X P iiifi- iS »
г P S ! » r f ^ l E «
'BP,
Координатные сетки используются, чтобы очертить логарифмические декады на графиках. В 4-
X логарифмическом изображении значения отображаются от 26 до 262,143. Таким образом,
первая логарифмическая декада располагается от 26 до 262. Линии показыны только в
графиках, которые показывают логарифмические параметры.
9 Оптимизируйте напряжения, чтобы разместить отрицательную популяцию для каждого
флуоресцентного параметра в первую логарифмического декаду (рис. 3-6).
Рис. 3-6 Неокрашенная пробирка Контроля после настройки РМТ
--- стр. 15 ---
10 Щелкните Record (Запись); когда все события зарегистрированы, удалите неокрашенную
пробирку контроля из проточного цитофлуориметра.
Важно, чтобы Вы точно следовали всем последовательностям удаления пробирки. Отказ
следовать этой последовательности может привести к пролитию биологически опасного
материала или переносу между образцами.
• Щелкните Remove Tube (Удалить пробирку).
Появится окно продвижения.
• Держите пробирку с образцом одной рукой, в то время как другой рукой Вы перемещаете
рычаг аспиратора влево до упора.
Всегда придерживайте пробирку с образцом, когда Вы помещаете рычаг аспиратора в сторону.
Если Вы перемещаете рычаг, не поддерживая пробирку, она може вьшасть из SIT и
потенциально подвергнуть Вас биологической опасности.
• Удалите пробирку из SIT.
• Отпустите рычаг аспиратора. Очистка SIT происходит, когда плечо аспиратора находится в
центре.
Не перемещайте рычаг аспиратора или не устанавливайте друг>то пробирку в SIT, пока не
исчезнет окно.
! П p m r p ! » « t O S ? н е т Я п я и « r t * f k n h
« в
• Когда окно продвижения исчезает. Вы можете загрузить следующую пробирку' в SIT.
Не изменяйте напряжения РМТ после того, как первая пробирка компенсации была записана.
Чтобы вычислить компенсацию, все пробирки должны быть записаны с теми же самыми
параметрами настройки напряжения РМТ. Если Вы должны скорректировать напряжение РМТ
для последующей пробирки компенсации. Вы снова должны будете сделать запись для всех
Пробирок компенсации.
Вычисление компенсации
/f
--- стр. 16 ---
Прежде, чем Вы сможете вычислить компенсацию, Вы должны будете сделать запись данных
для каждого единично окрашенного контроля.
1 Установите первую окрашенную пробирку контроля на проточный цитофлуориметр.
Удостоверьтесь сначала, что окно Remove tube исчезло.
2 В Acquisition Controls frame нажмите кнопку Next (Следующий).
Указатель Acquisition передвинется к следующей пробирке в Browser и начнется сбор.
Никогда не кладите на проточный цитофлуориметр тяжелые предметы; это может привезти к
изменению данных.
3 Проверьте, что гейт Р1 все еще окружает популяцию, представляющую интерес.
4 Нажмите Ctrl на указатель Acquisition, чтобы сделать запись данных.
5 Когда запись закончена, нажмите Remove Tube.
Не устанавливайте следующую пробирку, пока не закончена очистка SIT и не исчезло окно
Remove tube. Если Вы устанавливаете пробирку прежде, чем окно исчезает, промывка SIT
может загрязнить, растворить или переполнить ваш образец или вызвать биологически опасное
пролитие.
6 Установите следующую пробирку в SIT.
7 Повторите шаги 2 - 6 до пока не будут записаны данные для всех окрашенных пробирок
контроля.
Растягивание гейтов
Теперь, когда данные записаны. Вы должны создать гейты вокруг положительных популяций на
гистограмме для каждой окрашенной пробирки контроля.
1 Дважды щелкните первую Окрашенную пробирк}' Контроля (FITC Окрашенный Контроль),
чтобы определить расположение соответствующих графиков на рабочем листе.
2 Создайте Интервальный гейт вокруг положительной по флуоресценции популяции на
гистограмме (рис. 3-7).
Совет Используйте инструмент Auto-Interv’al (Автоматическое создание интервалов), чтобы
быстро создать Интервальный гейт вокруг популяции. Чтобы сохранить инструмент
выбранным, чтобы не н>'жно было нажимать инструмент для каждой оставшейся пробирки,
удерживайте клавишу CTRL первый раз, когда Вы нажимаете инструмент. Инструмент остается
выбранным, пока Вы не нажмете Esc или выберите другой инструмент.
Рис. 3-7 Гейтирование положительных популяций
3 Дважды щелкните след\тощую Окрашенную пробирку Контроля в Browser, чтобы определить
расположение соответствующих графиков на рабочем листе.
4 Повторите шаги 2 и 3 для оставшихся Пробирок компенсации.
Создавание матрицы компенсации
Установив однажды все области, Вы можете вычислить компенсацию.
1 Выберите Instrument > Instrument Setup > Calculate Compensation (Вычислить компенсацию).
! 6
--- стр. 17 ---
Если вычисление прошло успешно, появляется диалоговое окно, где Вы можете ввести
название установки компенсации.
2 Введите название установки компенсации; нажмите ОК.
ЕЕ
Совет Чтобы прослеживать установки компенсации, включите название Эксперимента, дату
или и то, и другое, в название установки.
Названная установка автоматически связывается с параметрами настройки прибора для
Эксперимента.
Совет Удалите Compensation Specimen (Образец компенсации), чтобы сохранить место в
Browser.
BD Biosciences рекомендуют, чтобы Вы подтвердили установки компенсации, проведя контроль
процесса прежде, чем Вы проведете анализ образцов.
Запись данных и анализ
Как только Вы оптимизируете параметры настройки прибора для вашего типа образца. Вы
можете сделать запись и анализировать данные.
Во время анализа записанные данные отображаются в графиках, используется гейты, чтобы
определить популяциии, представляющие интерес. Вы можете использовать полные рабочие
листы, чтобы просмотреть и оптимизировать данные прежде, чем они записаны. Программное
обеспечение BD FACSDiva анализирует гейтированные данные и вычисляет статистику,
которую Вы можете распечатать или экспортировать.
Этот раздел описывает, как использовать особенности программного обеспечения BD
FACSDiva. чтобы сделать запись и проанализировать образцы данных. В качестве примера
буд>т записаны и проанализированы данные для двух образцов, окрашенных следующими
реактивами: CD14 FITC/CD16+CD56 PE/CD8 PerCP-Cy5.5/CD19 PE-Cy7/CD3-APC/CD4 АРС-
Су7.
Две стратегии показаны, чтобы можно было многократно использовать объекты анализа. Если
Вы используете полный рабочий лист, чтобы анализировать данные. Вы можете многократно
использовать стратегию анализа, отображая данные
для различных пробирок на одном и том же рабочем листе. Альтернативно, Вы можете
скопировать объекты анализа на множество пробирок одновременно.
Настройка полного рабочего листа
Этот раздел показывает Вам, как использовать полный рабочий лист, чтобы предварительно
просмотреть и сделать запись данных для множественных образцов. Чтобы переключиться
между стандартным и полным представлением рабочего листа, нажмите кнопку Global
Worksheets (Полный рабочий лист) панели инструментов Worksheet.
1 Создайте новый Образец; переименуйте в LWB Образец.
2 Создайте две пробирки под Образцом LWB; переименуйте пробирки соответственно.
Например, T/B/NKJ)01 и Ш/МК_002.
3 Создайте полный рабочий лист; переименуйте его в Запись данных.
• Если предпочтение Default global worksheet (Полный рабочий лист, заданный по умолчанию)
отмечено в User Preferences (опция по умолчанию), полный рабочий лист уже прислтствует.
--- стр. 18 ---
Разверните папку Полные Рабочие листы, чтобы определить расположение и переименовать
рабочий лист.
• Если Default global worksheet рабочего листа не включен, создайте рабочий лист, нажимая
кнопку New Global Worksheet (Новый полный рабочий лист) в панели инсьрументов Browser.
Вы можете создать до десяти полных рабочих листов на Эксперимент.
4 Используйте диалоговое окно Experiment Layout (План эксперимента), чтобы определить для
каждой пробирки метки и число собьггий, для которых необходимо сделать запись.
Метки параметров определяются в просмотре Experiment Layout. Метки появятся на
графических осях и во всех просмотрах статистики.
• Выберите Experiment > Experiment Layout.
• На закладке Labels (Метки) введите соответствующие метки для пробирки. Например, введите
CD4 в поле FITC; используйте клавишу Tab, чтобы перейти к следующему полю.
« г
• На закладке Acquisition введите 10 О О О событий для пробирок T/B/NK_001 и T/B/NK_002;
нажмите ОК. Обратите внимание, что закладка Acq. в Inspector модифицируется автоматически.
В Ь ,Л .1 1 Л 1 "И
5 Ha полном рабочем листе создайте соответствующие графики, чтобы просмотреть данные.
Например, создайте точечные графики FSC против SSC, FITC против РЕ, РегСР-Су5-5 против
РЕ и АРС против АРС-Су7.
Совет Нажмите Ctrl на инструмент Plot (График), чтобы сохранить выбранный инструмент,
пока Вы не создадите все графики. Нажмите любую другую кнопку, чтобы отменить выбор.
Запись данных
Обратите внимание на то, что если Save Analysis After Recording (Сохранять анализ после
записи) включен в User Preferences чтении, копия данных, отображенных в полном рабочем
листе, будет сохранена для каждой записанной пробирки. Если Вы не хотите сохранять копию
данных, отключите это предпочтение.
1 Установите первую пробирку с образцом на проточный цитофлуориметр.
2 Переместите указатель Acquisition на первую пробирку; нажмите Acquire.
Никогда не кладите на проточный цитофлуориметр тяжелые предметы; это может привезти к
изменению данных.
3 В то время, как данные собираются, растяните область вокруг лимфоцитов; настройте другие
графики, чтобы показать данные по популяции Лимфоцитов.
4 Щелкните Record, чтобы сделать запись данных.
5 Когда все события записаны, следуйте этим инструкциям для удаления пробирки.
--- стр. 19 ---
Важно, чтобы Вы точно следовали всем последовательностям удаления пробирки. Отказ
следовать этой последовательности может привести к пролитию биологически опасного
материала или переносу между образцами.
• Щелкните Remove Tube.
Появится окно продвижения.
• Держите пробирку с образцом одной рукой, в то время как другой рукой Вы перемещаете
рычаг аспиратора до упора влево.
Всегда придерживайте пробирку с образцом, когда Вы помещаете рычаг аспиратора в сторону.
Если Вы перемещаете рычаг, не поддерживая пробирку, она може вьшасть из SIT и
потенциально подвергн}ть Вас биологической опасности.
• Удалите пробирку из SIT.
• Отпустите рычаг аспиратора. Очистка SIT происходит, когда плечо аспиратора находится в
центре.
Не перемещайте рычаг аспиратора или не устанавливайте другую пробирку в SIT, пока не
исчезнет окно.
|«
6 Когда окно продвижения исчезнет, Вы можете загрузить следующ ую пробирку в SIT.
7 Переместите указатель на соответств>тощую пробирку в Browser и нажмите Acquire.
8 Просмотрите данные в полном рабочем листе; нажмите Record, чтобы сделать запись данных.
9 Повторите щаги 5 - 8 пока не буд}т записаны данные для всех пробирок.
10 (Необязательный) Распечатайте Experiment-level instrument settings или отчет Instrument
Status.
Чтобы напечатать параметры настройки, щелкните правой кнопкой мыщи прибора по значку
параметров настройки и выберите Print.
Анализирование данных
Этот раздел описывает, как установить графики, гейты и просмотр статистики, чтобы
проанализировать записанные данные. К концу этого раздела ващ анализ должен выглядеть как
на рис. 3-8 .
1 Создайте новый полный рабочий лист; переименуйте его как T/B/NK анализ.
2 Выберите первую пробирку под LWB Образцом и создайте следующие графики на щаблоне
анализа:
• FSC против SSC
• АРС против РЕ
• АРС против РЕ-Су7
• АРС против РегСР-Су5-5
• АРС против АРС-Су7
• гистограмму FITC.
3 Измените размеры графиков так, чтобы они уместились на одной странице, как показано на
рис. 3-8.
4 Растяните гейт вокруг лимфоцитов; используйте Population Hierarchy (Иерархию популяций),
чтобы переименовать популяцию как Лгимфоциты.
/ 3
--- стр. 20 ---
5 Выделите все графики кроме FSC против SSC и гистограммы FITC и определите, чтобы
показывались только популадия лимфоцитов.
Удерживайте клавишу CTRL в то время как Вы выбираете следующие графики. Как только все
графики выбраны, нажмите на переключатель рядом с Лимфоцитами в Plot Inspector.
6 Выделите все графики и нажмите закладку Title (Название) в Plot Inspector; отметьте
переключатели, чтобы отобразить названия пробирки и Популяции в заголовках графиков.
I Создайте Statistics view (Просмотр статистики); отредактируйте просмотр, чтобы показать
популяцию Лимфоцитов и субпопуляций, отобразите среднее значение для всех флуорохромов.
Для получения инструкций о том, как создавать и редактировать Statistics view, см. Руководство
пользователя BD FACSDiva
8 Растяните область вокруг CD3+ популяции на графике CD3 АРС против CD 16+56 РЕ;
назовите популяцию Т-Клетками.
Совет При растягивании областей убедитесь, что включили в гейт события на графических
осях.
9 Растяните область вокруг CD 16+56+ популяции на том же графике; назовите популяцию NK-
Клетками.
10 Растяните область вокруг популяции CD 19 на графике CD3 АРС против CD 19 РЕСу7;
назовите популяцию В-Кчетками.
II Выберите популяцию Т-клеток в просмотре Population Hierarchy; растяните область вокруг
дважды позитивной популяции на графике CD3 АРС против CD8 РегСР-Су5-5 и назовите
популяцию Т-Цитостаттеской.
Поскольку популяци Т-клеток выбрана первой, Т-цитотоксические клетки становятся
подмножеством всех Т-клеток.
12 Выберите популяцию Т-клеток в просмотре Population Hierarchy; растяните область вокруг
дважды позитивной популяции на графике CD3 АРС против /АРССу7 и назовите популяцию Т -
хелперы. Клетки Т-хелперы добавляются как второе подмножество Т-клеток.
13 Выберите гистограмму CD 14 FITC; растяните интервальный гейт вокруг моноцитов и
назовите популяцией Моноцитов.
14 Распечатайте анализ. См. рис. 3-8 в качестве примера.
Рис. 3-8 Анализ лимфоцитов (пример)
--- стр. 21 ---
В Ч C jt a n w r
H U K С - Й 1 :
D e ctiiv
) P £ * s n i ; b ,~ c tk
f0.3ir
3 . W < i:.iij
m• Я Г
ч сH i
J i ’ II!-
• 5 0 5
jJ T in
1 2 1
E « e !S l« liiK e r r t t . e - O o B !S w tim c n U a m t L A ST U P f - N K ! > ! T J f t M . _ C 0 '
( > > r n t t iD a f c { « ( Г . З С , annual
SO r iwnrsatai:'
t 'S p u W l i C . ')
■ r cm #f
Щ т н е < о е :
P r j f - ( . : 8 f ! S .
C « 6 - .S 6 P £ . r t C C g fftC ^ '- i iO lS P £ C y 7 v i . C D if lP C - » C t< a . » C - t v ? - “
IM
e tv}.m
i,№^ tsЛ 4 ( .
M
) %
» w » t
ia 5 jf( i
2 8 . J 0 b
■ « . - M r
I*"Ijj
M e « r <
У Ш- ( ■
- Ч ?
3 )
r $ \ 4 H 6I4«
w » w _
j< ? K
Й 1 . ) ! М
6 8 'К Оs a e e '
/ 4 У
М « ; а г :
l. 4 ? 0
& t6 'f OfШ
Повторное использование анализа
Теперь, когда стратегия анализа определена, Вы можете использовать ее, чтобы
проанализировать оставшиеся пробирки в Эксперименте. Полные рабочие листы позволяют
Вам применять стратегию анализа к серии файлов данных, не сохраняя анализ каждый раз.
После предварительного просмотра данных Вы можете распечатать анализ или сохранить его в
Tube-specific
worksheet (Рабочий лист определенной пробирки) (см. следующий раздел Сохранение анализа).
1 Переместите указатель Acquisition на следующую пробирку под LWB Образцом.
2 Просмотрите данные полного рабочего листа; внесите изменения в гейт, если необходимо.
Корректировки будут также применены к следующей пробирке, которая просматривается на
полном рабочем листе. Если Вы не хотите изменять полный рабочий лист, сохраняйте анализ,
как описано в следующем разделе и вносите изменения на рабочий лист пробирки.
Сохранение анализа
После создания объектов анализа на полном рабочем листе, анализ не будет сохраняться для
каждой пробирки. Если Вы хотите сохранить копию анализа какой-то пробирки, сделайте
следующее.
1 Откройте полный рабочий лист T/B/NK в Browser.
2 Щелкните правой кнопкой мыщи по объект}' анализа и выберите Сору (Копировать).
Ш к л » S s d J f i K .
Ш n f t t M
. Anali'stsot^ea inder glcbal w^fteheet
3 Ha панели инструментов Worksheet нажмите кнопку Global Worksheets, чтобы переключиться
к просмотру Рабочего листа.
4 Создайте новый рабочий лист для пробирки назначения; переименуйте рабочий лист
соответственно.
5 Выберите пробирку в Browser; щелкните правой кнопкой мыши по значку Tube и выберите
Paste (Вставить).
Элементы полного рабочего листа скопированы в новый рабочий лист. Вы можете просмотреть
анализ, дважды щелкнув по пробирке в Browser.
Совет Применяйте анализ к нескольким пробиркам, выбирая более одной пробирки до того, как
Вы выберите Paste. Удостоверьтесь, что Вы не выбрали никаких других объектов анализа
--- стр. 22 ---
вместе с пробирками. Включите Tube-specific worksheet, чтобы автоматически создать новый
рабочий лист для вставляемых объектов анализа.
Отметьте, что Вы можете автоматически сохранить копию анализа для каждой пробиркой,
включая Save Analysis After Recording прежде, чем сделаете запись данных пробирки. В этом
случае, графики анализа помещаются в рабочий лист, который является открытым во время
записи. Чтобы контролировать, куда помещены графики, создайте новый рабочий лист прежде,
чем записаны данные.
Выход из системы
Когда Вы закончили использование программного обеспечения BD FACSDiva. но не готовы
выключить систему, выберите File> > Log Out (Выход из системы).
Рабочее пространство BD FACSDiva скроется и появится окно Log In (Вход).
Щ Г
о »
Это оставит систему доступной для входа следующего оператора. Чтобы заверщить работу
системы в конце дня, см. Ежедневное отключение.
Работа с образцами с использованием программного обеспечения
FACSCanto.
При открытии программы появляется рабочий лист. Рабочий лист позволяет вам анализировать
группы образцов, настраивать параметры прибора и сохранять данные, получать
автоматический анализ.
Заполнение рабочего листа:
1. Введите имя пациента
2. номер пациента
3. номер пробирки
4. выберите панель
5. Выберите номер карусели если вы используете загрузчик Loader
Анализ проб
1 .Введите всю информацию в рабочий лист
2. Подготовете Loader (опция)
3. Проверьте готовность прибора, используя окно Status
4. из меню выберите показывать Detectors
5. Сохраните рабочий лист
6. нажмите Load tube
7. последовательно вставляйте все пробирки, с помощью опции Load tube
8. Появится окно с результатами
9. Когда все пробы проанализированы, вы вернетесь в рабочий лист
1 0 . В конце дня когда выполните процедуру выключения.
Ежедневное отключение
i t
--- стр. 23 ---
в конце дня выполните процедуру Отключение жидкостей, чтобы удалить раствор BD
FACSFlow из всех линий и промыть их заключающим раствором BD FACS. Это препятствует
солевым кристаллам забивать жидкостные линии.
1 Удалите пробирку с образцом, если она установлена в проточный цитофлуориметр.
Не оставляйте пробирку в SIT во время отключения жидкостей, поскольку промывочная
жидкость и слив будет попадать в пробирку.
2 Выберите Instrument > Fluidics Shutdown (Прибор > Отключение жидкостей). Следующее
сообщение появится.
0 (
3 Освободите слив и снова долейте жидкости, если запрошено. См. Опорожнение сливного
контейнера или Замена к-убитейнера. Если Вы отсоединили какой-либо жидкостный контейнер
для долива. заправьте систему перед продолжением.
Чтобы сохранить жидкие линии от наращивания соли, не выходите из программного
обеспечения или отключите прибор пока не закончится процедура отключения жидкостей.
4 Нажмите ОК когда увидите сообщение о том, что система может быть отключена.
I J F i t n e l * ; * » » r t i T » w i
Itftf
5 Выключите основную кнопку прибора.
Выключайте подачу тока к проточный цитофлуориметр по крайней мере один раз в день.
Выполнение этого приводит к опорожнению ловушки конденсата в стойке с растворами и
препятствует переполнению избытка влаги.
Во время отключения Вы должны услышать шипение, вызванное удалением конденсата из
насосов стойки с растворами.
6 (Необязательный) Выйдите из программного обеспечения BD FACSDiva и выключите
компьютер.
Оставьте компьютер включенным, если Вы будете использовать проточный цитофлуориметр
еще в течение дня или бущете выполнять автономный анализ.
л ъ