Набор реагентов для выявления ДНК микромицетов рода Histoplasma методом полимеразной цепной реакции "АмплигенГисто-ЭФ" по ТУ 9398-009-01898084-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК МИКРОМИЦЕТОВ РОДА HISTOPLASMA МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ «АМПЛИГЕНГИСТО-ЭФ» ПО ТУ 9398-009-01898084-2013 1. НАЗНАЧЕНИЕ Набор реагентов для выявления ДНК микромицетов рода Histoplasma методом полимеразной цепной реакции «АмплигенГисто-ЭФ» предназначен для обнаружения ДНК возбудителей гистоплазмоза Н. capsulatum var. capsulatum, Н. capsulatum var. duboisii, H. capsulatum var. farciminosum в пробах выделенных культур, биологического материала и из объектов окружающей среды методом полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов. 2. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика, эпидемиологический мониторинг. Набор реагентов может быть использован в учреждениях, имеющих Лицензию на деятельность в области использования возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных I-IV групп патогенности, стационарных и мобильных лабораториях, имеющих санитарно-эпидемиологическое заключение на проведение работ с микроорганизмами I-IV групп патогенности. т 3. ТРЕБОВАНИЯ К ПЕРСОНАЛУ, УЧАСТВУЮЩЕМУ В ВЫПОЛНЕНИИ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследования могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим или иным образованием, окончившие соответствующие курсы специальной подготовки с освоением методов безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) I-II групп патогенности. 4. ПРИНЦИП МЕТОДА Выявление ДНК возбудителя гистоплазмоза методом полимеразной цепной реакции с электрофоретическим учетом результатов основано на амплификации фрагмента гена MS8 (mold-specific MS8 protein), кодирующего белок Histoplasma capsulatum , размером 361 п.н. Метод полимеразной цепной реакции - ПЦР представляет собой повторяющиеся циклы синтеза - амплификации специфической области ДНК-мишени в присутствии Taq- полимеразы, дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, буферного раствора и олигонуклеотидных праймеров, распознающих ДНК-мишень. Детекция результатов осуществляется путём обнаружения полосы свечения ДНК после электрофореза при визуализации агарозного геля в проходящем ультрафиолете. 5. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА Компоненты набора являются одноразовыми. В состав набора входят 5 реагентов: --- стр. 2 --- Реактив Описание Объем (мл) Количество ПЦР-смесь №1 Смесь праймеров, дНТФ - прозрачная бесцветная жидкость, расфасована под воск 0,005 50 пробирок ПЦР - смесь №2 прозрачная жидкость синего цвета, содержащая ПЦР-буфер и ДНК-полимеразу 0,6 1 пробирка Минеральное масло прозрачная бесцветная вязкая жидкость 1,0 2 пробирки ОКО стерильная вода - прозрачная бесцветная жидкость 0,3 1 пробирка пко препарат ДНК Н. capsulatum var. capsulatum - прозрачная бесцветная жидкость 0,3 1 пробирка Набор реагентов «АмплигенГисто-ЭФ» рассчитан на проведение 50 определений, включая положительные и отрицательные контроли. 6. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ*: Наименование Основные характеристики или обозначения документации, производитель Амплификатор Терцик Амплификатор «Терцик», «ДНК-технология», Россия Бокс биологической безопасности III класса Бокс биологической безопасности III класса “БАВ - Ламинар-C’’Protect mobile-1,8, «Ламинарные системы», Россия ПЦР-бокс Бокс абактериальной воздушной среды для работы с ДНК-пробами (ПЦР-бокс) при проведении ПЦР-диагностики БАВ-ПЦР- "Ламинар-С" «Ламинарные системы», Россия Микроцентрифуга-встряхиватель Микроцентрифуга-встряхиватель «ТЭТА-2», «Биоком», Россия Термостат твердотельный Термостат твердотельный от 25 до 100 °С, Термо 24-15, «Биоком», Россия. Микроцентрифуга настольная Микроцентрифуга на 13400 об/мин "MiniSpin" "Eppendorf", Германия Отсасыватель медицинский Отсасыватель медицинский "ОМ-1" ОАО "Утес", Россия Источник питания Источник питания "Эльф-8" "ДНК- технология", Россия Камера для горизонтального электрофореза Камера для горизонтального электрофореза SubCellGTSystem "БиоРад", США Гель-документирующая система Г ель-документирующая система GelDoc RX "БиоРад", США Термостат твердотельный с функцией охлаждения термостат твердотельный с функцией охлаждения от 4 до 120 °С, «Биоком», Россия Набор электронных или механических дозаторов переменного объема Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (0,5-10, 10-100 мкл, 100-1000 мкл), Eppendorf, Германия Штатив-подставка для дозаторов Штатив-подставка для дозаторов универсальная на 5 дозаторов, «Хеликон», Россия Штатив «рабочее место» для Штатив «рабочее место» для микропробирок --- стр. 3 --- микропробирок на 0,6 мл на 0,6 мл, 10x20 мест, «Хеликон», Россия Штатив «рабочее место» для микропробирок на 1,5 мл Штатив «рабочее место» для микропробирок на 1,5 мл, 5x10 мест с увеличенным расстоянием между лунками, «Хеликон», Россия Холодильник от 2 до 8 °С с морозильной камерой не выше минус 18°С «Атлант», Россия Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барьером до 10 мкл ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барьером до 100 мкл ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барьером до 200 мкл ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США Наконечники универсальные для дозаторов переменного объемом с аэрозольным барьером до 1000 мкл ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США Пробирки для ПЦР объемом 0,6 мл ФСЗ 2012/11892 «Axygen», США Одежда одноразовая медицинская из нетканого и полимерного материалов РЗН 2013/668 Перчатки медицинские диагностические одноразовые. Часть 1. Спецификация на перчатки из каучукового латекса или раствора ГОСТ Р 52239-2004 Хлороформ, хч ТУ 6-09-4263-76 Изопропиловый спирт, хч ТУ 6-09-402-85 Спирт этиловый ФС 42-3072-00 «Chitinase from Trichoderma viride» «Sigma-ALDRICH», Германия Фенол, чда ГОСТ 6417-72 Натрий уксуснокислый 3-водный, хч ГОСТ 199-78 Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77 Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72 Трис-(оксиметил)-аминометан, хч ТУ 6-09-4292-76 Натрия гидроокись ГОСТ 4328-77 Магний хлористый, 6-водный ГОСТ 4209-77 * Примечание: допускается применение оборудования другого типа, по своим характеристикам не уступающего рекомендуемому. 7. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА Хранение в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 «Условия транспортирования и хранения медицинских иммунобиологических препаратов» при температуре не выше минус 16°С. ПЦР - смесь-1 H.capsulatum хранить в защищенном от света месте. Срок годности набора при хранении компонентов набора при температуре не выше минус 16 °С в течение 6 мес. 8. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ Набор реагентов «АмплигенГисто-ЭФ» с истекшим сроком годности применению не подлежит. ПЦР-анализ выполняется в соответствии с СП 1.3.3118-13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)» и МУ 1.3.2569 -09 «Организация --- стр. 4 --- работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - IV групп патогенности». Работать только в одноразовых перчатках, использовать и менять при каждой операции одноразовые наконечники для автоматических пипеток с аэрозольным барьером. Одноразовую пластиковую посуду (пробирки, наконечники) необходимо сбрасывать в специальный контейнер. Поверхности столов, а также помещения, в которых проводится постановка ПЦР, до начала и после завершения работ необходимо облучать ультрафиолетовым светом. Все лабораторное оборудование, в том числе пипетки, штативы, лабораторная посуда, а также все рабочие растворы должны быть строго стационарными. Запрещается переносить их с одного рабочего места на другое. 9. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ Материалом для исследования служат: суспензии культур возбудителя гистоплазмоза или подозрительных изолятов; пробы крови, мокроты; суспензий органов (печень, селезенка, легкие) человека и мелких млекопитающих, образцы почвы, смывов с поверхности, пробы воды открытых водоемов, погадки летучих мышей или птиц. Каждый образец исследуемой пробы должен быть объемом не менее 0,5 мл. Все пробы до проведения исследования должны храниться при температуре минус 18°С. Материал для исследования забирают в стерильные емкости с герметично завинчивающимися крышками в соответствии с требованиями СП 1.3.3118 - 13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности», МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории», МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности». Транспортирование материала в лабораторию для исследований проводят при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С в течение 1 суток в соответствии с СП 1.2.036 - 95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности». После проведения предварительной обработки проб допускается их транспортировка при температуре от минус 16 до минус 20 °С в течение 7 суток или в сосуде Дьюара с жидким азотом - длительно. 9.1. Подготовка проб чистых культур микроорганизмов для ПЦР. Исследуемые культуры грибов в мицелиальной фазе роста культивируют на агаре Сабуро при 28 °С в течение 30 суток. Дрожжевые формы H.capsulatum выращивают на FT-arape с добавлением цельной крови и L-цистеина при 37 °С в течение 10-14 суток, в зависимости от штамма. Из выросших культур готовят суспензии в 0,9 % стерильном растворе натрия хлорида, pH 7,2±0,1. Затем взвеси микромицетов обеззараживают добавлением раствора мертиолата нартия до конечной концентрации 0,1 мг/мл (1:1000) с последующим прогреванием на водяной бане 40 мин при 56±1 °С и инкубацией при комнатной температуре в течение 24 ч. После обеззараживания и фильтрования суспензий грибов, проводят подсчет клеток исходных взвесей артроспор и дрожжевой фазы микромицетов в камере Горяева. Подсчет клеток необходимо проводить из нескольких разведений (суспензии грибов титруют с шагом разведений в 5 раз). Затем взвеси микромицетов разводят 0,9 % раствором хлорида натрия таким образом, чтобы концентрация составляла 1 х 104 м.к./мл. В микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл переносят 1 мл полученной суспензии и центрифугируют в течение 10 мин при 12000 об/мин. Осадок ресуспендируют в 100 мкл 50 мМ фосфатного буфера. --- стр. 8 --- ДНК из проб биологического материала) или аналогичных. Работу проводят в соответствии с инструкциями к указанным наборам. 10.3 Проведение ПЦР - амплификация ДНК Реактивы для проведения ПЦР извлекают из холодильной камеры. Все реакционные компоненты добавляют отдельными наконечниками с аэрозольным барьером с помощью дозаторов переменного объема. 10.3.1. Подготовка пробирок для проведения ПЦР Общий объем реакции - 25 мкл, включая объем ДНК-пробы - 10 мкл. 1. Отобрать необходимое количество микропробирок с ПЦР-смесью №1 для постановки реакции равное количеству исследуемых проб + 2 контрольных. 2. Пробирки с ПЦР-смесью №1 промаркировать и внести по 10 мкл ПЦР-смеси №2 не повреждая слой воска. 3. Нанести в каждую пробирку по 1 капле минерального масла (30 мкл) и внести под масло по 10 мкл исследуемых ДНК-проб. 4. Поставить контрол и: а) 1 положительный (ПКО) - вместо ДНК-пробы внести 10 мкл образца положительного контроля (ДНК Н.capsulatum var. capsulatum 6650); б) 1 отрицательный (ОКО) - вместо ДНК-пробы внести 10 мкл образца отрицательного контроля. 5. Установить пробирки в реакционный модуль прибора. 10.3.2. Проведение термоциклирования Подготовленные микропробирки помещают в термоциклер. Запускают на термоциклере программу (таблица). Когда температура в ячейках достигнет 95 °С (режим паузы), пробирки помещают в ячейки прибора, закрывают крышку и снимают программу с паузы. Таблица 3 Режим ПЦР Номер этапа Задаваемая температура реакционной смеси, °С Время экспозиции Количество циклов Пауза 95.0 1 95.0 5 мин 1 2 94.0 Юс 62.0 Юс 45 72.0 Юс 3 72.0 1 мин 1 4 10.0 Режим хранения По окончании ПЦР реакционную смесь (продукты реакции) хранят при температуре от 2 °С до 8 °С. 11. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ Регистрацию результатов ПЦР осуществляют методом электрофореза в 1,5% агарозном геле с использованием коммерческих наборов «ЭФ» (например, "Комплекта реагентов для электрофоретической детекции продуктов амплификации в агарозном геле "ЭФ", вариант 200, производство ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (ФСР 2008/03146)). Работу проводят в соответствии с инструкциями к указанным наборам. Электрофорез проводят при градиенте напряжения 5 В/см в течение 30 мин. 12. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ Результаты учитывают на основании наличия (или отсутствия) на электрофореграмме специфичных полос амплифицированной ДНК. --- стр. 9 --- К учету результатов исследуемых проб приступают только в случае прохождения положительного (К+), отрицательного (К-) контроля амплификации и ОКВ (табл. 4) ______________________________________Таблица 4 Наименование контроля Амплификация фрагмента ДНК размером 361 п.н. К + + К- - ОКВ - Учет и интерпретация результатов проводят в соответствии с таблицей 5. Таблица 5 Пробы Амплификация фрагмента ДНК размером 361 п.н. Результат анализа Исследуемые пробы + Положительный/ В пробе выявлена ДНК H.capsulatum — Отрицательный/ В пробе ДНК H.capsulatum не обнаружена Выявляется полоса, не соответствующая фрагменту положительного контроля Отрицательный/ В пробе ДНК H.capsulatum не обнаружена 13. АНАЛИТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА 13.1. Аналитическая чувствительность. Набор должен выявлять ДНК H.capsulatum в суспензии концентрацией не менее 1 х104кл/мл. 13.2. Аналитическая специфичность. Набор не должен давать положительных результатов с ДНК микроорганизмов других родов суспензиях концентрацией 1 х 104 кл/мл 13.3. Диагностическая чувствительность Диагностическая чувствительность - не менее 99 % с доверительной вероятностью 90 % при исследовании 208 положительных образцов, содержащих H.capsulatum в концентрации не менее 1 х104 кл/мл. 13.4. Диагностическая специфичность Диагностическая специфичность - не менее 91 % с доверительной вероятностью 90% при исследовании 208 положительных образцов, содержащих H.capsulatum и 90 отрицательных образцов, содержащих гетерологичные микроорганизмы ( Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis, Coccidioides posadasii, Paracoccidioides brasiliensis, Penicillium citreoviridae, Cryptococcus neoformans, Geotrichum immitis, Penicillium citrinum, Candida kruissi, Aspergillus fumigatus, Pseudomonas aeruginosa). 14. БЕЗОПАСНАЯ УТИЛИЗАЦИЯ Уничтожение неиспользованных компонентов набора или наборов реагентов с истекшим сроком годности проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10. 15. ГАРАНТИИ И ИНФОРМАЦИЯ О ПРОИЗВОДИТЕЛЕ Производитель гарантирует качество набора реагентов «АмплигенГисто-ЭФ» при соблюдении условий транспортирования, хранения и эксплуатации в течение указанного срока годности. Федеральное казенное учреждение здравоохранения «Волгоградский научно- исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФКУЗ Волгоградский научно- --- стр. 10 --- исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора) (400131, г. Волгоград, ул. Голубинская, 7. Тел. (8442) 37-37-74. Зав. отделом биологического и технологического контроля ФКУЗ Волгоградский НИПЧИ Роспотребнадзора Прохватилова Е.В. Директор ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора