Набор реагентов для выявления и идентификации ДНК возбудителя сибирской язвы методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-Сибирская язва-РВ) — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 2 ---
1. НАЗНАЧЕНИЕ
1.1 Полное название набора
«Набор реагентов для выявления и идентификации ДНК возбудителя си
бирской язвы методом полимеразной цепной реакции в реальном времени
(ОМ-Скрин-Сибирская язва-РВ) по ТУ 9398-023-46395995-2013».
1.2 Предназначение набора и его диагностическая роль
Набор реагентов «ОМ-Скрин-Сибирская язва-РВ» предназначен для каче
ственного определения (скрининг, мониторинг) ДНК возбудителя сибирской
язвы {Bacillus anthracis) в биологическом материале - кровь, содержимое вези
кул, отделяемое карбункула или язвы, струпья, мокрота, спинномозговая жид
кость, моча, испражнения, экссудаты, кусочки органов, а также в материале от
животных, продовольственном сырье и продуктах животного происхождения,
объектах окружающей среды - почва, трава, фураж, подстилка, вода и т.д., а
также культурах микроорганизмов методом полимеразной цепной реакции с
учетом результатов в режиме реального времени.
Диагностическая роль набора реагентов заключается в возможности его
использования в поддержке диагностики специфической патологии (сибирская
язва) при исследовании материала от больного (подозрительного на заболева
ние) и индикации патогенных биологических агентов (ПБА), в объектах окру
жающей среды; как ускоренного предварительного теста при выполнении био
логического метода исследования и идентификации подозрительных культур;
для эпидемиологического мониторинга.
1.3 Область применения набора
Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика си
биреязвенной инфекции, специфическая индикация патогенных биологических
агентов, эпидемиологический мониторинг, научные исследования. Набор мо
жет быть использован в учреждениях медицины и здравоохранения, в лабора
ториях Центров гигиены и эпидемиологии и противочумных учреждениях Рос
потребнадзора, в эпидемиологических службах, а также в стационарных и мо-
--- стр. 3 ---
бильных лабораториях специализированных учреждений других министерств и
ведомств, в том числе Министерства обороны.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
Компоненты набора являются одноразовыми.
Набор реагентов «ОМ-Скрин-Сибирская
технического обслуживания и калибровки.
2.1 Состав набора
Набор реагентов состоит из 5 реагентов.
язва-РВ» не требует
№ Состав набора Описание Объем Кол-во
1. Реакционная смесь в стрипованных
микропробирках, РС-СЯ
сухое вещество белого
цвета
1 мг 6 стрипов
2. Разбавитель, РБ прозрачная бесцветная
жидкость 0,8 мл 1 пробирка
3. Положительный контрольный
образец, ПКО-СЯ
сухое вещество белого
цвета
2 мг 3 пробирки
4. Раствор для разбавления ПКО, ОКО прозрачная бесцветная
жидкость 1 мл 1 пробирка
5. Внутренний положительный
контроль выделения, ВПК-В
сухое вещество
белого цвета
2 мг 1 пробирка
Реакционная смесь в стрипованных микропробирках (лиофилизованная),
РС-СЯ, расфасована в микропробирки в стрипах объемом 0,2 мл, упакованные
в непрозрачный полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 9x12 см, состав:
эквимолярная смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, восемь
олигонуклеотидных праймеров, четыре флуоресцентных зонда, фермент Taq
ДНК-полимераза, синтетическая ДНК внутреннего положительного контроля
(ВПК), трегалоза.
Разбавитель, РБ, расфасован в пробирку из полипропилена объемом 1,5 мл
с завинчивающейся крышкой, упакованную в полиэтиленовый пакет Zip-Lock
размером 4x7 см, состав: ПЦР-буфер, хлорид магния, глицерол, вода для ПЦР.
Положителъный контрольный образец (лиофилизованный), ПКО-СЯ,
расфасован в три пробирки из полипропилена объемом 0,5 мл с завинчиваю
щейся крышкой, упакованные в полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером
6x7 см, состав: смесъ четырех рекомбинантных плазмид pGem-T, три из кото-
--- стр. 4 ---
рых содержат встроенные специфические последовательности Д1Ж возбудите
ля сибирской язвы; фрагмент хромосомного локуса ssp или фрагмент гена lef на
плазмиде рХ01 или фрагмент гена сарА на плазмиде рХ02 и четвертая - спе
цифический фрагмент контрольной Д1Ж.
Раствор для разбавления ГЖО, ОКО, расфасован в пробирку из полипро
пилена объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой, упакованную в полиэти
леновый пакет Zip-Lock размером 4x7 см, состав: ТЕ буфер.
Внутренний положительный контроль выделения, ВПК-В (лиофилизо-
ванный), расфасован в пробирку из полипропилена объемом 0,5 мл с завинчи
вающейся крышкой, упакованную в полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером
4x7 см, состав: рекомбинантная плазмида pGem-T со встроенным специфиче
ским фрагментом ДНК.
Примечание: ингредиентами, которые могут влиять на измерения, явля
ются праймеры и флуоресцентные зонды, основной характеристикой которых
для конечного пользователя является температура отжига Та, составляющая
60 °С. Данная характеристика реализуется с помощью температурно
временного режима амплификации, следовательно, его соблюдение является
строго обязательным.
2.2 Количество анализируемых проб
Набор реагентов рассчитан на 48 определений, включая контрольные
образцы.
2.3 Метод исследования
Обнаружение специфических фрагментов нуклеиновых кислот
возбудителя сибирской язвы основано на использовании метода
мультиплексной полимеразной цепной реакции с получением результата в
режиме реального времени - ПЦР-РВ.
При амплификации методом ПЦР-РВ используются шесть
олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих специфические фрагменты
ДЬЖ возбудителя сибирской язвы, два олигонуклеотидных праймера,
фланкирующие ДНК внутреннего положительного контроля ПЦР-РВ, а также
--- стр. 5 ---
четыре флуоресцентных зонда. Процесс амплификации специфичных
фрагментов заключается в повторяющихся циклах температурной денатурации
ДНК, отжига праймеров с комплементарными последовательностями и
последующей достройке полинуклеотидных цепей с этих праймеров ДНК-
полимеразой с детекцией результатов в режиме реального времени. Постановка
ПЦР-РВ осуществляется на специальных приборах, например, «АНК-32 (32М,
48)» (ПАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), CFX-96 (BioRad, США), или
эквивалентных по характеристикам (см. п. 5.1 настоящей инструкции).
Набор реагентов «ОМ-Скрин-Сибирская язва-РВ» позволяет одновремен
но выявлять в одной реакционной смеси три специфических последовательно
сти ДНК возбудителя сибирской язвы: хромосомный локус ssp - по каналу
флуоресценции R6G, фрагмент гена lef на плазмиде рХ01 — по каналу FAM,
фрагмент гена сарА на плазмиде рХ02 — по каналу ROX, а также внутренний
положительный контроль - по каналу Су5.
Положительный результат теста означает, что исследуемый материал со
держит ДНК возбудителя сибирской язвы. Отрицательный результат теста оз
начает, что исследуемый материал не содержит ДНК возбудителя сибирской
язвы.
2.3 Ограничения метода
В инфицированном материале ДНК Bacillus anthracis может быть не об
наружена по причине ингибирования ПЦР-РВ и/или недостаточной эффектив
ности выделения ДНК. Для достижения показателей аналитической чувстви
тельности используемый набор для выделения должен обеспечивать эффектив
ность выделения НК на уровне не менее 20 %.
Причиной получения ложноположительного результата является конта
минация на этапе выделения ДНК либо проведения реакции ПЦР-РВ. Ложно
положительный результат выявляется с помощью отрицательных контрольных
образцов выделения и ПЦР-РВ (п. 7.5 настоящей инструкции).
Причиной получения ложноотрицательного результата является ингиби
рование ПЦР-РВ и/или недостаточная эффективность выделения ДНК. Ложно-
--- стр. 6 ---
отрицательный результат выявляется с помощью внутреннего положительного
контрольного образца и ПЦР-РВ (п. 7.5 настоящей инструкции).
3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1.1 Чувствительность
Чувствительность - не более 1,0-10^ копий ДНК в миллилитре пробы
(копий-мл'*). Данный показатель достижим при условии отбора для выделения
ДНК аликвоты исходного материала (пробы) объемом не менее 100 мкл.
3.1.2 Специфичность
Специфичность - ложноположительные и ложноотрицательные
результаты при анализе образцов ДНК Bacillus anthracis (3 заведомо
положительных образца), ДНК близкородственных бацилл B.cereus,
B.thuringiensis, B.megaterium, B.subtilis, a также ДНК гетерологичных видов
Y.pestis, В.mallei, В.pseudomallei, Vcholerae, F.tularensis, E.coli. (12 заведомо
отрицательных образцов) отсутствовали.
При проведении исследований наблюдалась полная
внутрипостановочная, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость
для всех положительных образцов.
3.2 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Диагностическая чувствительность - при исследовании 148 проб
бактериальных суспензий культур микроорганизмов и 72 проб биологического
материала и объектов окружающей среды (220 положительных проб)
содержащих В. anthracis в концентрации 1,0-10^ м.к./мл положительный
результат получен в 220 случаях. Диагностическая чувствительность - не менее
99,0 % с доверительной вероятностью 90 %.
Диагностическая специфичность - при исследовании 72 отрицательных
образцов, содержащих другие виды бацилл {Bacillus subtilis, Bacillus cereus,
Bacillus mesentericus, Bacillus mycoides, Bacillus thuringiensis,
Bacillus anthracoides, Bacillus stearothermophilus, Bacillus licheniformis,
--- стр. 7 ---
л
в концентрации не менее 1,0-10 м.к./мл, отрицательный
ответ в ПНР получен во всех 72 случаях. Диагностическая специфичность - не
менее 96 % с доверительной вероятностью 90%.
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ
Работу проводят в соответствии с требованиями СП 1.3.3118 - 13 «Безо
пасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности», МУ 1.3.2569 -
09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации
нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-
IV групп патогенности», МУК 4.2.2413-08 «Лабораторная диагностика и обна
ружение возбудителя сибирской язвы».
Потенциальный риск применения набора - класс 3 (п. 9 приложения № 2
к приказу Минздрава России от 06.06.2012 № 4н).
4.1 Необходимость обучения персонала
Для выполнения анализа с помощью данного набора реагентов необхо
димо участие специалиста с высшим медицинским образованием, прошедшего
обучение на лицензированных курсах специализации по работе с ПБА I-II
групп патогенности и по ПЦР-диагностике, а также лаборанта со средним спе
циальным медицинским образованием. Персонал должен иметь навыки работы
с биохимическими реактивами и современным лабораторным оборудованием.
4.2 Меры безопасности, позволяющие предохранять оператора
Все компоненты набора в используемых концентрациях являются неток
сичными, вредного влияния на организм оператора не оказывают. При работе с
набором следует соблюдать обычные меры предосторожности для лаборато
рий:
- пользоваться лабораторными перчатками и надевать лабораторные ха
латы;
- не принимать пищу, пить или курить в лабораторных помещениях;
- после работы с пробами и реактивами следует тщательно вымыть руки
водой с мылом.
7
--- стр. 8 ---
Избегать контакта с кожей, глазами и слизистыми оболочками, при попа
дании на них компонентов набора промыть большим количеством воды. При
приеме внутрь компонентов набора реагентов за медицинской помощью следу
ет обратиться немедленно.
4.3 Необходимые меры предосторожности в отношении влияния фи
зических факторов
При использовании набора реагентов нет необходимости принимать ме
ры предосторожности в отношении влияния магнитных полей, внешних элек
трических воздействий, электростатических разрядов, давления или перепадов
давления, перегрузки, источников термического воспламенения.
4.4 Необходимые меры предосторожности против специальных рис
ков
При использовании набора реагентов нет необходимости принимать ме
ры предосторожности против любых специальных рисков при использовании
или реализации, поскольку в состав изделия не входят вещества человеческого
или животного происхождения с учетом их потенциальной инфекционной при
роды.
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ
РАБОТЕ С НАБОРОМ
5.1 Рекомендуемое измерительное оборудование
Прибор для ПЦР-РВ - зарегистрированный в РФ как медицинское
изделие и имеющий каналы детекции, соответствующие красителям РАМ, R6G,
ROX, Су5 (либо их спектральным аналогам) со следующими характеристиками
- ?Ч1акс.возб/^акс.эм. (№1 - 490нм/520нм, №2 - 525нм/550нм, №3 - 550нм/580нм,
№4 - 630нм/665нм), например, «АНК-32 (32М, 48)», CFX-96.
5.2 Указания о необходимости использования специального
оборудования
Работу с набором следует проводить в настольном боксе с бактерицидной
лампой (например, БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», ЗАО «Ламинарные системы»,
г. Миасс, Россия), установленном в рабочей зоне 3 (МУ 1.3.2569-09).
8
--- стр. 9 ---
5.3 Дозирующие устройства
Набор автоматических пипеток переменного объема на 0,5-10 мкл,
2 -2 0 мкл, 10-100 мкл и на 20-200 мкл;
штатив-карусель для данных пипеток.
5.4 Другое используемое оборудование
Микроцентрифуга-вортекс (например, «Циклотемп-901»);
микроцентрифуга для стрипов (например, «Циклотемп-903»);
штативы для наконечников, микропробирок на 0,5 и 1,5 мл;
штатив для работы со стрипами (кат. номер СТ-15, ЗАО Синтол);
холодильник на 2-8 °С.
5.5 Лабораторная посуда
Емкости для сброса наконечников и микропробирок.
5.6 Материалы и реагенты, не входящие в состав набора
Одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с
аэрозольным барьером до 10 мкл;
одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с
аэрозольным барьером до 20 мкл;
одноразовые наконечники для пипеток переменного объема с
аэрозольным барьером до 200 мкл;
ТЕ-буфер (кат. номер В-014, ЗАО «Синтол»);
набор реагентов для выделения Д1Ж/РНК;
отдельный халат и одноразовые медицинские перчатки;
комплект средств для обработки рабочего места.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ
Получение и обработка биологического материала, зараженного или
подозрительного на зараженность возбудителем сибирской язвы, не являются
частью процедуры анализа с использованием набора реагентов «ОМ-Скрин-
Сибирская язва-РВ».
--- стр. 19 ---
добавляют по 10 мкл во все пробирки с исследуемыми образцами после их
обеззараживания и в пробирку с ОКО-В.
При применении на этапе пробоподготовки наборов производства ЗАО
«Синтол» добавления ВПК-В для контроля выделения нуклеиновых кислот не
требуется, поскольку он входит в состав лизирующего компонента.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
7.1 Процедура приготовления положительного контрольного образца
В пробирку с сухим содержимым ПКО-СЯ из набора реагентов «ОМ-
Скрин-Сибирская язва-РВ» добавляют 200 мкл ОКО, перемешивают на
вортексе до полного растворения, центрифугируют 5 секунд при 3000 об-мин'*.
Хранение разведенных препаратов ПКО-СЯ допускается при температуре не
выше минус 20 °С не более месяца.
7.2 Разведение препарата ДНК (при необходимости)
Для выявления и идентификации ДНК возбудителя сибирской язвы
необходимо внести в реакцию 20 мкл препарата Д1Ж. В случае необходимости,
раствор препарата ДНК разводят с помощью ТЕ-буфера.
7.3. Проведение ПЦР
Расход каждого реагента
На одну постановку ПЦР требуется:
1 пробирка - для ОКО;
1 пробирка - для ОКО-В;
1 пробирка - для ПКО-СЯ;
необходимое количество пробирок по числу исследуемых образцов.
На каждый анализ расходуется:
- 20 мкл ПКО-СЯ;
- 20 мкл ОКО.
7.3.1 Последовательность проведения этапов анализа
Анализ с помощью набора реагентов проводится в один этап:
- включают прибор, запускают программу в соответствии с инструкцией
по эксплуатации;
19
--- стр. 20 ---
- вводят согласно таблице 1 в диалоговый интерфейс программы прибора
параметры температурно-временного режима ПЦР-РВ и вводят красители
FAM, R6G, ROX и Су5;
Таблица 1 - Температурно-временной режим амплификации
№
п/п Температурно-временной режим Число
циклов
1 95 °С - 300 секунд 1
2
60 °С - 40 секунд
Считывание сигнала флуоресценции 50
3 95 °С - 15 секунд
- вводят сведения об образцах по соответствующему красителю (при ис
пользовании прибора АНК32, 32М или 48 ввод сведений об образцах возможен
после запуска программы амплификации) и активируют прибор в соответствии
с инструкцией по эксплуатации;
- набор реагентов извлекают из холодильника, РБ, ОКО перемешивают
на вортексе и центрифугируют в течение 5 секунд при 3000 об-мин‘';
- устанавливают необходимое количество микропробирок с реакционной
смесью РС-СЯ в штатив (соответствует числу исследуемых проб плюс три для
контролей: ПКО, ОКО, ОКО-В) и маркируют в соответствии с протоколом
исследования на боковой стенке либо на крышке пробирки (в зависимости от
прибора);
- открывают крышки микропробирок и вносят в них по 15 мкл РБ;
- используя наконечники с аэрозольным барьером, последовательно
вносят в микропробирки по 20 мкл ОКО, ОКО-В и далее по 20 мкл растворов
исследуемых образцов, в необходимой повторности*, закрывают крышки дан
ных микропробирок;
- вносят в микропробирки в соответствии с маркировкой по 20 мкл ПКО-
СЯ, закрывают крышки данных микропробирок;
перемешивают содержимое микропробирок на вортексе и
центрифугируют 5 секунд при 3000 об'мин Помещают микропробирки в при-
20
--- стр. 21 ---
бор для ПЦР-РВ в соответствии с таблицей 2 и прикатывают крышки
микропробирок.
Таблица 2. Порядок исследования образцов
№ ячейки Образец
1 пко
2 око
3 око-в
4 исследуемый образец 1
5 исследуемый образец 1
6 исследуемый образец 2
7 исследуемый образец 2
8
- закрывают крышку прибора, запускают реакцию ПЦР-РВ и фиксируют в
рабочем журнале название файла с результатом работы прибора (расчетное
время анализа составляет около 2-х часов).
*Примечание: каждый образец рекомендуется анализировать в двух
повторах..
7.4 Процедура измерения результатов анализа
Оценку результатов проводят с помощью приборов для ПЦР-РВ, напри
мер, «АНК-32 (32М, 48)», CFX-96 или эквивалентных им (см. п. 5.1 настоящей
инструкции).
Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции (регистрация роста
сигнала) означает любую величину порогового цикла Ct менее 50. Отсутствие
регистрации роста сигнала прибором описывается программой прибора, на
пример, как величина порогового цикла (Ct >=50 в приборах А1Ж), либо как ее
отсутствие (N/A в приборах фирмы BioRad) и т.п. Подробная информация при
ведена в руководстве по эксплуатации конкретного прибора.
Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции по каналам FAM,
R6G и ROX относительно отрицательного контроля свидетельствует о наличии
специфических фрагментов ДНК возбудителя сибирской язвы в данной микрб-
пробирке.
21
--- стр. 25 ---
8. РАСЧЕТЫ
8.1 Используемые компьютерные программы
Для проведения ПЦР-РВ и оценки её результатов используют специали
зированное программное обеспечение, поставляемое производителем прибора,
например программа AHK_Shell версия 33 и выше, поставляемая с приборами
«АНК-32М», «АНК-48» или Bio-Rad CFX Manager 2.0 и выше, поставляемая с
прибором CFX-96. Работу с программным обеспечением осуществляют соглас
но руководству по эксплуатации прибора.
9. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУА
ТАЦИИ НАБОРА
9.1 Условия хранения набора
В соответствии с ТУ 9398-023-46395995-2013 - в сухом, защищенном от
света месте при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С. Суммарный срок хране
ния при температуре от плюс 9 до плюс 20 °С не должен превышать 14 суток в
течение срока годности набора реагентов.
9.2 Условия транспортирования набора
Транспортирование набора реагентов «ОМ-Скрин-Сибирская язва-РВ»
должно производиться в соответствии с ТУ 9398-023-46395995-2013 крытым
транспортом (автомобильным, железнодорожным либо воздушным) при темпе
ратуре от плюс 2 до плюс 8 °С. Допускается транспортирование до 14 суток при
температуре до плюс 20 °С.
9.3 Срок годности набора
Срок годности набора реагентов составляет 12 месяцев с даты выпуска
предприятием-изготовителем. Серии наборов реагентов с истекшим сроком
годности применению не подлежат. Срок годности вскрытых реагентов соот
ветствует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов,
если в инструкции не указано иное. Срок годности разведенных препаратов
ПКО-СЯ не более месяца при температуре хранения не выше минус 20 °С.
25
--- стр. 26 ---
9.4 Информация по безопасной утилизации
Использованные пробирки с ампликонами, наконечники, перчатки, ве
тошь для обработки поверхностей в ПЦР-боксе, собирают в пластиковые за
крывающиеся емкости, выносят в рабочую зону 4-1 либо специально предна
значенное вспомогательное помещение (МУ 1.3.2569-09) с целью последующей
инактивации еогласно требованиям СанПиН 2.1.7.2790-10.
Наборы с истекшим сроком годности, а также в случае повреждения упа
ковки, утилизируют по классу А, как эпидемиологически безопасные отходы,
по составу приближенные к ТБО (СанПиН 2.1.7.2790-10).
9.5 Гарантийные обязательства производителя
Предприятие-производитель гарантирует соответствие функциональных
характеристик набора реагентов требованиям, указанным в технической и экс
плуатационной документации, в течение установленного срока годности
(1 2 месяцев) при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и
применения.
Рекламации на качество набора реагентов «ОМ-Скрин-Сибирская язва-
РВ» направлять на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» (127550, г. Моск
ва, ул. Тимирязевская, 42, тел. (495) 984-69-93, факс. (499) 977-74-55
E.mail: syntol@syntol.ru).
При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по при
менению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании,
фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и меди
цинских работников при применении набора реагентов, рекомендуется напра
вить сообщение на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» по адресу, ука
занному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую органи
зацию в соответствии с действующим законодательством.
Директор ФКУЗ «Российский / Ч "
научно-исследовательский противоч;^мн]ый.
институт «Микроб» Роспотребнадзора ^
академик РАН, д.м.н., профессор \
X,
в.в. Кутырев
2Ъ
--- стр. 27 ---
■TlpDiiffliQ, Пронумеровано,
проброшюровано листов^
Генеральный^иректор
Г7( А.В. Кузуба