Набор реагентов для выявления и идентификации ДНК возбудителя чумы методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-Чума-РВ) по ТУ 9398-012-46395995-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА Приказом Росздравнадзора от № УТВЕРЖДАЮ Генеральный директор А.Кузубов ИНСТРУКЦИЯ по применению «Набора реагентов для выявления и идентификации ДНК возбудителя чумы методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОМ-Скрин-Чума-РВ) по ТУ 9398-012-46395995-2013» 2015 --- стр. 2 --- риях специализированных учреждений других министерств и ведомств, в том числе Министерства обороны. 2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА Компоненты набора являются одноразовыми. Набор реагентов «ОМ-Скрин-Чума-РВ» не требует технического обслуживания и калибровки. 2.1 Состав набора Набор реагентов состоит из 5 реагентов. № п/п Состав комплекта Описание Объем Кол-во 1. Реакционная смесь в стрипованных микропробирках, РС-Чума сухое вещество белого цвета 1 мг 6 стрипов 2. Разбавитель, РБ прозрачная бесцветная жидкость 0,8 мл 1 пробирка 3. Положительный контрольный образец, ПКО-Чума сухое вещество белого цвета 2 мг 3 пробирки 4. Раствор для разбавления ПКО, ОКО прозрачная бесцветная жидкость 1 мл 1 пробирка 5. Внутренний положительный контроль выделения, ВПК-В сухое вещество белого цвета 2 мг 1 пробирка Реакционная смесь в стрипованных микропробирках (лиофилизованная), PC-Чума, расфасоваца в микропробирки в стрипах объемом 0,2 мл, упакованные в непрозрачный полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 9x12 см, состав: эквимолярная смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, восемь олигонуклеотидных праймеров, четыре флуоресцентных зонда, фермент Taq ДНК-полимераза, синтетическая ДНК внутреннего положительного контроля (ВПК), трегалоза. Разбавитель РБ, расфасован в пробирку из полипропилена объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой, упакованную в полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 4x7 см, состав: ПЦР-буфер, хлорид магния, глицерол, вода для ПЦР. Положительный контрольный образец (лиофилизованный), ПКО-Чума расфасован в три пробирки из полипропилена объемом 0,5 мл с завинчиваю щейся крышкой, упакованные в полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 6x7 см, состав: смесь трех рекомбинантных плазмид pGem-T, содержащих 3 --- стр. 3 --- встроенные специфические последовательности ДНК Yersinia pestis : фрагмент * ч хромосомной нуклеотидной последовательности hmsH\ фрагмент хромосомно го гена, кодирующего метилтрансферазу (YPO2088), и специфический фраг мент нуклеотидной последовательности (YPPCP 1.09с) видоспецифичной плаз миды pPCPl (pPst) чумного микроба. Раствор для разбавления ГЖО, ОКО, расфасован в пробирку из полипро пилена объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой, упакованную в полиэти леновый пакет Zip-Lock размером 4x7 см, состав: ТЕ буфер. Внутренний положительный контроль выделения, ВПК-В (лиофилизо- ванный), расфасован в пробирки из полипропилена объемом 0,5 мл с завинчи вающейся крышкой, упакованные в полиэтиленовый пакет Zip-Lock размером 4x7 см, состав: рекомбинантная плазмида pGem-T со встроенным специфиче ским фрагментом ДНК. Примечание: ингредиентами, которые могут влиять на измерения, явля ются праймеры и флуоресцентные зонды, основной характеристикой которых для конечного пользователя является температура отжига Та, составляющая 60 °С. Данная характеристика реализуется с помощью температурно временного режима амплификации, следовательно, его соблюдение является строго обязательным. 2.2 Количество анализируемых проб Набор реагентов рассчитан на 48 определений, включая контрольные образцы. 2.3 Метод исследования Обнаружение специфических фрагментов нуклеиновых кислот Y.pestis основано на использовании метода мультиплексной полимеразной цепной реакции с получением результата в режиме реального времени - ПЦР-РВ. При амплификации методом ПЦР-РВ используются шесть олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих специфические фрагменты ДНК Y.pestis, два олигонуклеотидных праймера, фланкирующие ДНК внутреннего положительного контроля ПЦР-РВ, а также четыре 4 --- стр. 4 --- флуоресцентных зонда. Процесс амплификации специфичных фрагментов заключается в повторяющихся циклах температурной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплементарными последовательностями и последующей достройке полинуклеотидных цепей с этих праймеров ДНК-полимеразой с детекцией результатов в режиме реального времени. Постановка ПЦР-РВ осуществляется на специальных приборах, например, «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX-96» («BioRad», США), или эквивалентных по характеристикам (см. п. 5.1 настоящей инструкции). Набор реагентов «ОМ-Скрин-Чума-РВ» позволяет одновременно выяв лять в одной реакционной смеси фрагмент хромосомной нуклеотидной после довательности hmsH, ассоциированной с высокой вирулентностью Y.pestis для животных и человека - по каналу FAM, видоспецифическую последователь ность хромосомного гена (YPO2088), кодирующего метилтрансферазу чумного микроба - по каналу флуоресценции ROX, уникальный фрагмент нуклеотид ной последовательности (YPPCP 1.09с) видоспецифической плазмиды pPCPl (pPst), несущей детерминанты патогенности возбудителя чумы - по каналу флуоресценции R6G, а также внутренний положительный контроль - по каналу флуоресценции Су5. Положительный результат теста означает, что исследуемый материал со держит ДНК возбудителя чумы. Отрицательный результат теста означает, что исследуемый материал не содержит ДНК возбудителя чумы. 2.4 Ограничения метода В инфицированном материале ДНК Yersinia pestis может быть не обнару жена по причине ингибирования ПЦР-РВ и/или недостаточной эффективности выделения ДНК. Для достижения показателей аналитической чувствительности используемый набор для выделения должен обеспечивать эффективность выде ления НК на уровне не менее 20 %. Причиной получения ложноположительного результата является конта минация на этапе выделения ДНК или на этапе проведения реакции ПЦР-РВ. 5 --- стр. 5 --- Ложноположительный результат выявляется с помощью отрицательных кон- трольных образцов выделения и ПЦР-РВ (п. 7.5 настоящей инструкции). Причиной получения ложноотрицательного результата является ингиби рование ПЦР-РВ и/или недостаточная эффективность выделения ДНК. Ложно отрицательный результат выявляется с помощью внутреннего положительного контрольного образца и ПЦР-РВ (п. 7.5 настоящей инструкции). 3 АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИ КИ 3.1 АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ 3.1.1 Чувствительность Чувствительность - не более 1,0-10 копий ДНК в миллилитре пробы (копий-мл'1). Данный показатель достижим при условии отбора для выделения ДНК аликвоты исходного материала (пробы) объемом не менее 100 мкл. 3.1.2 Специфичность Специфичность - ложноположительные и ложноотрицательные результаты при анализе образцов ДНК возбудителя чумы (11 заведомо положительных образцов), ДНК близкородственных микроорганизмов Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica, а также ДНК гетерологичных микроорганизмов (10 заведомо отрицательных образцов) отсутствовали. При проведении исследований наблюдалась полная внутрипостановочная, межпостановочная и межсерийная воспроизводимость для всех положительных образцов. 3.2 ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ Диагностическая чувствительность - при исследовании 180 проб бактери альных суспензий культур микроорганизмов и 48 проб биологического мате риала и объектов окружающей среды (228 положительных проб) содержащих Y pestis в концентрации 1,0-10 м.к./мл положительный результат получен в 228 случаях. Диагностическая чувствительность - не менее 98,5 % с довери тельной вероятностью 90 %. 6 --- стр. 6 --- Диагностическая специфичность - при исследовании 228 положительных V . образцов, содержащих Y.pestis (hmsH\ pPst +), Y.pestis (hmsFf, pPst +), Ypestis (hmsH, pPsf), положительный результат получен во всех 228 случаях, при исследовании 60 отрицательных образцов, содержащих гетерологичные • 5 микроорганизмы в концентрации не менее 1,0-10 м.к./мл, отрицательный ответ в ПЦР получен во всех 60 случаях. Диагностическая специфичность - не менее 99 % с доверительной вероятностью 90%. 4 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ Работу проводят в соответствии с требованиями СП 1.3.3118 - 13 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности», МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патогенности», МУК 4.2.2940-11 «Порядок организации и проведения лабораторной диагностики чумы для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней», МУ 3.1.3.2355-08 «Методические указания по организации и проведению эпидемиологического надзора в природных очагах чумы на территории Российской Федерации». Потенциальный риск применения набора - класс 3 (п. 9 приложения № 2 к приказу Минздрава России от 06.06.2012 № 4н). 4.1 Необходимость обучения персонала Для выполнения анализа с помощью данного набора реагентов необхо димо участие специалиста с высшим медицинским образованием, прошедшего обучение на лицензированных курсах специализации по работе с ПБА I-II групп патогенности и по ПЦР-диагностике, а также лаборанта со средним спе циальным медицинским образованием. Персонал должен иметь навыки работы с биохимическими реактивами и современным лабораторным оборудованием. 4.2 Меры безопасности, позволяющие предохранять оператора Все компоненты набора в используемых концентрациях являются неток сичными, вредного влияния на организм оператора не оказывают. При работе с 7 --- стр. 7 --- набором следует соблюдать обычные меры предосторожности для лаборато рий: - пользоваться лабораторными перчатками и надевать лабораторные ха латы; - не принимать пищу, пить или курить в лабораторных помещениях; - после работы с пробами и реактивами следует тщательно вымыть руки водой с мылом. Избегать контакта с кожей, глазами и слизистыми оболочками, при попа дании на них компонентов набора промыть большим количеством воды. При приеме внутрь компонентов набора реагентов за медицинской помощью следу ет обратиться немедленно. 4.3 Необходимые меры предосторожности в отношении влияния фи зических факторов При использовании набора реагентов нет необходимости принимать ме ры предосторожности в отношении влияния магнитных полей, внешних элек трических воздействий, электростатических разрядов, давления или перепадов давления, перегрузки, источников термического воспламенения. 4.4 Необходимые меры предосторожности против специальных рис ков При использовании набора реагентов нет необходимости принимать ме ры предосторожности против любых специальных рисков при использовании или реализации, поскольку в состав изделия не входят вещества человеческого или животного происхождения с учетом их потенциальной инфекционной при роды. 5 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ 5.1 Рекомендуемое измерительное оборудование Прибор для ПЦР-РВ - зарегистрированный в РФ как медицинское изделие и имеющий каналы детекции, соответствующие красителям FAM, 8 --- стр. 8 --- R6G, ROX, Cy5 (либо их спектральным аналогам) со следующими характеристиками - А^акс.возбДмакс.эм. (№ 1 - 490нм/520нм, № 2 - 525нм/550нм, № 3 - 550нм/580нм, № 4 - 630нм/665нм), например, «АНК-32 (32М, 48)», «CFX-96». 5.2 Указания о необходимости использования специального оборудования Работу с набором следует проводить в настольном боксе с бактерицидной лампой (например, БАВ-ПЦР-«Ламинар-С», ЗАО «Ламинарные системы», г. Миасс, Россия), установленном в рабочей зоне 3 (МУ 1.3.2569-09). 5.3 Дозирующие устройства Набор автоматических пипеток переменного объема на 0,5-10 мкл, 2-20 мкл, 10-100 мкл и на 20-200 мкл; штатив-карусель для данных пипеток. 5.4 Другое используемое оборудование Микроцентрифуга-вортекс (например, «Циклотемп-901»); микроцентрифуга для стрипов (например, «Циклотемп-903»); штативы для наконечников, микропробирок на 0,5 и 1,5 мл; штатив для работы со стрипами (кат. номер СТ-15, ЗАО Синтол); холодильник на 2-8 °С. 5.5 Лабораторная посуда Емкости для сброса наконечников и микропробирок. 5.6 Материалы и реагенты, не входящие в состав набора Одноразовые наконечники аэрозольным барьером до 10 мкл; для пипеток переменного объема одноразовые наконечники аэрозольным барьером до 20 мкл; для пипеток переменного объема одноразовые наконечники аэрозольным барьером до 200 мкл; для пипеток переменного объема ТЕ-буфер (кат. номер В-014, ЗАО «Синтол»); набор реагентов для выделения ДНК/РНК; 9 --- стр. 9 --- отдельный халат и одноразовые медицинские перчатки;^ комплект средств для обработки рабочего места. 6 АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ПРОБЫ Получение и обработка биологического материала, зараженного или подозрительного на зараженность возбудителем чумы, не являются частью процедуры анализа с использованием набора реагентов «ОМ-Скрин-Чума-РВ». 6.1 Тип исследуемых образцов Исследованию подлежат препараты нуклеиновых кислот, приготовленные (согласно МУК 4.2.2940-11 и МУ 3.1.3.2355-08) из следующего материала: содержимое бубона, содержимое язвы, мокроты, мазков со слизистой зева; крови, мочи; испражнений; спинномозговой жидкости и др.; секционного материала; микробных культур; проб, отобранных в ходе эпизоотологического обследования на территории природного очага чумы (дикие и синантропные грызуны, их трупы, блохи, клещи и другие эктопаразиты), а также проб из объектов окружающей среды и воздуха. 6.2 Процедура получения биологического материала Все работы по -забору проб клинического и секционного материала от людей и из объектов окружающей среды осуществляют в строгом соответствии с требованиями СП 1.3.3118 - 13 «Безопасность работы с микроорганизмами I- II групп патогенности (опасности)», МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транс портирования биоматериалов в микробиологические лаборатории», МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы ам плификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим мик роорганизмы I-IV групп патогенности», МУК 4.2.2940-11 «Порядок организа ции и проведения лабораторной диагностики чумы для лабораторий территори ального, регионального и федерального уровней», МУ 3.1.3.2355-08 «Методи ческие указания по организации и проведению эпидемиологического надзора в природных очагах чумы на территории Российской Федерации». 10 --- стр. 10 --- 6.2.1 Взятие материала от человека Кровь у людей берут из локтевой вены в количестве 10 мл с помощью одноразовой иглы (диаметр 0,8-1,1 мм) и специальной вакуумной системы типа «Vacuett» с ЭДТА или цитратом натрия либо стерильным шприцем в стерильные стеклянные или пластиковые пробирки с цитратом натрия (3,8 % раствор цитрата натрия в соотношении 1:9) Аккуратно перемешивают покачиванием до полного смешивания с антикоагулянтом. Мокроту забирают в количестве не менее 1,0 мл в одноразовые градуированные стерильные флаконы с широким горлом и завинчивающимися крышками объемом не менее 50 мл. Для разжижения мокроты применяют либо приготовленную ex tempore смесь NALC (N-ацетил-Ь-цистеина 0,25 г, 25 мл 4 % раствора NaOH, 25 мл 0,1 М тризамещенного натрия цитрата), либо раствор «Муколизин» (Na 2HP0 4 0,0774 М, NaH 2P0 4 0,0226 М, бетаМЭ 0,094 М, 5% азид натрия в конечной концентрации 0,05 %). Пробу объемом 1-2 мл смешивают либо с равным объемом смеси NALC, либо с пятикратным объемом раствора «Муколизин». Пробы со смесью NALC перемешивают покачиванием в течение 20-30 с и инкубируют в течение 15 мин, периодически встряхивая. Затем разводят 0,067 М фосфатным буфером (pH 6,8) до конечного объема 50 мл. Пробу центрифугируют в течение 10 мин при 9000 об мин'1. Осадок ресуспендируют в 100 мкл 0,9 % раствора натрия хлорида. Пробы с раствором «Муколизин» перемешивают покачиванием в течение 20-30 с и инкубируют в течение 20-30 мин, периодически встряхивая. Затем отбирают 1 мл разжиженной мокроты, помещают в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой и центрифугируют при 9000 об мин'1 в течение 10 мин. Осадок ресуспендируют в 100 мкл 0,9 % раствора натрия хлорида. Пунктат из бубона (везикул, пустул, карбункулов) берут шприцем емкостью не менее 5 мл. Кожу на участке, намеченном для прокола, обрабатывают 70 %-м спиртом, а затем смазывают 5 %-м раствором йода и вновь протирают 70 %-м спиртом. Иглу вводят с таким расчетом, чтобы ее v 1 1 --- стр. 11 --- острие достигло центральной части бубона, после чего, оттянув до отказа -V поршень, медленно вынимают иглу. Из-за расположения экссудата в чумном бубоне между плотными тканями количество его, попадающее в шприц, как правило, незначительно и часто заполняет только просвет иглы. После извлечения иглы из бубона через нее набирают в шприц 0,5 мл стерильного питательного бульона pH 7,2, содержимое переносят в стерильную пробирку с завинчивающейся пробкой. Бульон можно набрать в шприц и до начала пункции. В качестве метода, повышающего возможность выделения культуры чумного микроба, и в случае невозможности получить материал, в бубон вводят 0,3-0,5 мл стерильного 0,9 %-го раствора натрия хлорида или питательного бульона. При вскрывшемся бубоне забирают отдельно материал из периферической плотной части и отделяемое свища. Обе пробы исследуют раздельно. Перед взятием отделяемого язвы, везикулы, пустулы, карбункула или отторгнутого струпа прединъекционной дезинфицирующей салфеткой осто рожно очищают кожу вокруг пораженного места, при необходимости стериль ной марлевой салфеткой удаляют некротические массы, гной. Прокатывая там пон по раневой поверхности от центра к периферии в течение 5-10 с абсорби руют материал на тампон. Тампон с материалом помещают в стерильную про бирку или в транспортную среду. При использовании шприца иглу вводят у края везикулы (пустулы) и затем продвигают к середине. У карбункулов и язв пунктируют плотный край. Отделяемое из зева забирают натощак или через 3-4 ч после еды. Акку ратно прижимая язык шпателем, вводят тампон между дужками миндалин и язычком (нельзя касаться тампоном губ, щек, языка) и собирают материал с задней поверхности глотки, миндалин и участков воспаления или изъязвления слизистой. Тампон с материалом помещают в стерильную пробирку или про бирку с транспортной или питательной средой. У больных чумой с локализацией первичных бубонов в области головы и шеи дополнительно забирают на исследование слизистое отделяемое ротовой 12 --- стр. 15 --- 6.6 Выделение ДНК Для выделения НК используют зарегистрированные наборы реагентов сообразно происхождению проб. Для достижения показателей чувствительности объем аликвоты исходного материала (пробы) должен составлять не менее 100 мкл. Полученный препарат НК используется для проведения анализа с помощью набора реагентов «ОМ-Скрин-Чума-РВ». Для определения возможной контаминации на этапе выделения ДНК в каждую партию выделения наряду с исследуемым материалом включают отрицательный контроль выделения (ОКО-В), который анализируют далее в ПЦР-РВ. Для определения эффективности выделения ДНК из исследуемого материала в каждую пробу на этапе ее подготовки к анализу добавляют внутренний положительный контроль выделения (ВПК-В) из состава набора реагентов «ОМ-Скрин-Чума-РВ». Для его приготовления в пробирку с сухим содержимым ВПК-В вносят 200 мкл элюента из состава наборов реагентов для выделения, перемешивают на вортексе до полного растворения, центрифугируют 5 секунд при 3000 об-мин"1. Полученный раствор ВПК-В добавляют по 10 мкл'во все пробирки с исследуемыми образцами после их обеззараживания и в пробирку с ОКО-В. При применении на этапе пробоподготовки наборов производства ЗАО «Синтол» добавления ВПК-В для контроля выделения нуклеиновых кислот не требуется, поскольку он входит в состав лизирующего компонента. 7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1 Процедура приготовления положительного контрольного образца В пробирку с сухим содержимым ПКО-Чума из набора реагентов «ОМ-Скрин-Чума-РВ» добавляют 200 мкл ОКО, перемешивают на вортексе до полного растворения, центрифугируют 5 секунд при 3000 об-мин'1. Хранение разведенных препаратов ПКО-Чума допускается при температуре не выше минус 20 °С не более месяца. V . 16 --- стр. 16 --- 7.2 Разведение препарата ДНК (при необходимости) Для выявления и идентификации ДНК возбудителя чумы необходимо внести в реакцию 20 мкл препарата ДНК. В случае необходимости, раствор препарата ДНК разводят с помощью ТЕ-буфера. 7.3 Проведение ПЦР Расход каждого реагента На одну постановку ПЦР-РВ (без учета повторов) требуются: 1 пробирка - для ОКО; 1 пробирка - для ОКО-В; 1 пробирка - для ПКО; необходимое количество пробирок по числу исследуемых образцов. На каждый анализ расходуется: 20 мкл ПКО-Чума; 20 мкл ОКО. 7.3.1 Последовательность проведения этапов анализа Анализ с помощью набора реагентов проводится в один этап: - включают прибор, запускают программу в соответствии с инструкцией по эксплуатации; - вводят согласно таблице 1 в диалоговый интерфейс программы ампли- фикатора параметры температурно-временного режима ПЦР-РВ и вводят кра сители FAM, ROX, R6G и Су5; Таблица 1 - Температурно-временной режим амплификации № п/п Температурно-временной режим Число циклов 1 95 °С - 300 секунд 1 9 60 °С - 50 секунд Считывание сигнала флуоресценции 50 3 95 °С - 15 секунд - вводят сведения об образцах по соответствующему красителю (при ис пользовании прибора «АНК32 (32М, 48)» ввод сведений об образцах возможен 17 --- стр. 17 --- после запуска программы амплификации) и активируют прибор в соответствии V. с инструкцией по эксплуатации; - набор реагентов извлекают из холодильника, РБ, ОКО перемешивают на вортексе и центрифугируют в течение 5 секунд при 3000 об-мин'1; - устанавливают необходимое количество микропробирок с реакционной смесью PC-Чума в штатив (количество микропробирок соответствует числу исследуемых проб и контрольных образцов: ПКО, ОКО, ОКО-В) и маркируют в соответствии с протоколом исследования на боковой стенке, либо на крышке пробирки (в зависимости от прибора); - открывают крышки микропробирок и вносят в них по 15 мкл РБ; - используя наконечники с аэрозольным барьером последовательно вно сят в микропробирки согласно их маркировке по 20 мкл ОКО, ОКО-В и иссле дуемых образцов, в необходимой повторности*, закрывают крышки данных микропробирок. - вносят в микропробирки с маркировкой ПКО по 20 мкл ПКО-Чума, за крывают крышки данных микропробирок. - перемешивают содержимое микропробирок на вортексе и центрифуги руют 5 секунд при 3000 об мин’1 Помещают микропробирки в прибор для ПЦР- РВ в соответствии с таблицей 2 и прикатывают крышки микропробирок. Таблица 2. Порядок исследования образцов № ячейки Образец 1 ПКО 2 о к о 3 ОКО-В 4 исследуемый образец 1 5 исследуемый образец 1 6 исследуемый образец 2 7 исследуемый образец 2 8 - закрывают крышку прибора, запускают реакцию ПЦР-РВ и фиксируют в рабочем журнале название файла с результатом работы прибора (расчетное время анализа составляет около 2-х часов). 18 --- стр. 18 --- * Примечание: каждый образец рекомендуется анализировать в двух по- вторах. 7.4 Процедура измерения результатов анализа Оценку результатов проводят с помощью приборов для ПЦР-РВ, напри мер, «АНК-32 (32М, 48)», «CFX-96» или эквивалентных им (см. п. 5.1 настоя щей инструкции). Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции (регистрация роста сигнала) означает любую величину порогового цикла Ct менее 50. Отсутствие регистрации роста сигнала прибором описывается программой прибора, на пример, как величина порогового цикла (Ct > 50 в приборах «АНК»), либо как ее отсутствие (N/A в приборах фирмы «BioRad») и т.п. Подробная информация приведена в руководстве по эксплуатации конкретного прибора. Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции по каналам FAM, ROX и R6G относительно отрицательного контроля свидетельствует о наличии специфических фрагментов ДНК Y.pestis в данной микропробирке. Кинетическая кривая роста сигнала флуоресценции по каналу Су5 в слу чае отсутствия роста сигнала по каналам FAM, ROX и R6G свидетельствует об успешном прохождений реакции ПЦР-РВ и подтверждает отсутствие специфи ческих фрагментов ДНК Y.pestis в данной микропробирке. При этом наличие сигнала флуоресценции в данной микропробирке по каналу Су5 с пороговым циклом Ct менее 31,0 в сравнении с сигналом флуоресценции по каналу Су5 ОКО (Ct > 35,0), также свидетельствует об успешном выделении ДНК. 19 --- стр. 23 --- 8 РАСЧЕТЫ 8.1 Используемые компьютерные программы Для проведения ПЦР-РВ и оценки её результатов используют специали зированное программное обеспечение, поставляемое производителем прибора, например программа AHK Shell версия 33 и выше, поставляемая с приборами «АНК-32М», «АНК-48» или Bio-Rad CFX Manager 2.0 и выше, поставляемая с прибором CFX-96. Работу с программным обеспечением осуществляют соглас но руководству по эксплуатации прибора. 9 УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ, ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ И ЭКСПЛУА ТАЦИИ НАБОРА 9.1 Условия хранения набора В соответствии с ТУ 9398-012-46395995-2013 - в сухом, защищенном от света месте при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С. Суммарный срок хране ния при температуре от плюс 9 до плюс 20 °С не должен превышать 14 суток в течение срока годности набора реагентов. 9.2 Условия транспортирования набора Транспортирование набора реагентов «ОМ-Скрин-Чума-РВ» должно производиться в соответствии с ТУ 9398-012-46395995-2013 крытым транспор том (автомобильным, железнодорожным либо воздушным) при температуре от плюс 2 до плюс 8 °С. Допускается транспортирование до 14 суток при темпера туре до 20 °С. 9.3 Срок годности набора Срок годности набора реагентов составляет 12 месяцев с даты выпуска предприятием-изготовителем. Серии наборов реагентов с истекшим сроком год ности применению не подлежат. Срок годности вскрытых реагентов соответст вует сроку годности, указанному на этикетках для невскрытых реагентов, если в инструкции не указано иное. Срок годности разведенных препаратов ПКО-Чума не более месяца при температуре хранения не выше минус 20 °С. 24 --- стр. 24 --- 9.4 Информация по безопасной утилизации Использованные пробирки с ампликонами, наконечники, перчатки, ве тошь для обработки поверхностей в ПЦР-боксе, собирают в пластиковые за крывающиеся емкости, выносят в рабочую зону 4-1 либо специально предна значенное вспомогательное помещение (МУ 1.3.2569-09) с целью последующей инактивации согласно требованиям СанПиН 2.1.7.2790-10. Наборы с истекшим сроком годности, а также в случае повреждения упа ковки, утилизируют по классу А, как эпидемиологически безопасные отходы, по составу приближенные к ТБО (СанПиН 2.1.7.2790-10). 9.5 Гарантийные обязательства производителя Предприятие-производитель гарантирует соответствие функциональных характеристик набора реагентов требованиям, указанным в технической и экс плуатационной документации, в течение установленного срока годности (12 месяцев) при соблюдении всех условий транспортирования, хранения и применения. Рекламации на качество набора реагентов «ОМ-Скрин-Чума-РВ» направ лять на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» (127550, г. Москва, ул. Тими рязевская, 42, тел. (495) 984-69-93, факс. (499) 977-74-55 E.mail: syntol@syntol.ru). При выявлении побочных действий, не указанных в инструкции по при менению набора реагентов, нежелательных реакций при его использовании, фактов и обстоятельств, создающих угрозу жизни и здоровью граждан и меди цинских работников при применении набора реагентов, рекомендуется напра вить сообщение на предприятие-изготовитель ЗАО «Синтол» по адресу, ука занному выше, и в уполномоченную государственную регулирующую органи зацию в соответствии с действующим законодательством. Директор ФКУЗ «Российский научно-исследовательский институт «Микроб» Роспотребнадзора академик РАН, д.м.н., профессор В.В. Кутырев 25 --- стр. 25 --- ot ЗД Ф Прошито, пронумеровано, проброшюровано j * > листов Ф Генеральный директор П] и: м Д' (I Е