Набор реагентов для обнаружения ДНК возбудителей гельминтозов (Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis, Opistorchis felineus, Taenia solium, Diphyllobothrium latum) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в образцах биоматериала человека "Гельмо-скрин" по ТУ 9398-003-53300432-2013 — инструкция и характеристики

РУ: РЗН 2015/2770 от 19.06.2015 · класс риска 2б

Производитель: ООО "АльфаЛаб" (Россия)

Вид изделия: Множественные желудочно-кишечные патогены нуклеиновые кислоты ИВД, набор, анализ нуклеиновых кислот

В госконтрактах 44-ФЗ: 4 контракта, медианная цена за единицу 23 002 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
ООО «АльфаЛаб» «УТВЕРЖДАЮ»
«АльфаЛаб»
.А.Суворова
2013г.
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора реагентов 
для обнаружения ДНК возбудителей гельминтозов (Азсапз 
1шпЪпсо1с1ез, Еп1егоЪшз уегпнси1апз, ОрН^огсЫз ГеИпеиз, Т аета 
зоНиш, 01рЬу11оЬо1:Ьпит 1аШт) методом полимеразной цепной 
реакции (ПЦР) в образцах биоматериала человека
«Гельмо-скрин»
ВНИМАНИЕ! Изучите инструкцию перед началом работы


--- стр. 2 ---
1. НАЗНАЧЕНИЕ
Набор «Гельмо-скрин» предназначен для качественного обнаружения ДНК гельминтов 
(Азсапз 1итЪпсо1ёе$, Еп1егоЫиз уетйсгйапз, Ор 1$1;огсЫз ГеНпеиз, Таеша зоНиш, 
ОхрЬуИоЪойшит 1аШт).
Набор реагентов предназначен для выявления наиболее часто встречающихся у человека 
гельминтозов (энтеробиоза, аскаридоза, дифиллоботриоза, описторхоза, тениоза). 
Перечисленные инфекции имеют общие пути заражения и могут иметь сходные 
клинические проявления (нарушения функций желудочно-кишечного тракта, 
аллергические реакции, астенизация и др.), что обуславливает необходимость 
одновременного скрининга на наличие указанных возбудителей и проведения 
дифференциальной диагностики.
Материалом для исследования являются фекальные образцы.
Для выявления возбудителей используется амплификация специфических участков 
ДНК методом ПЦР с применением специфических олигонуклеотидов и меченых 
олигонуклеотидных зондов Тацтап. В присутствии фермента Тад-полимеразы происходит 
гибридизация олигонуклеотидов и зонда с комплементарным участком ДНК-мишени. 
Образование специфического продукта амплификации сопровождается отщеплением 
флуоресцентной метки (благодаря наличию у Та^-полимеразы 5’- экзонуклеазной 
активности) и появлению детектируемого флуоресцентного сигнала, регистрация 
которого проводится в режиме реального времени. Интенсивность флуоресценции прямо 
пропорциональна количеству специфических продуктов амплификации и, следовательно, 
нарастает с каждым последующим циклом.
Набор предназначен для использования на амплификаторах детектирующих для 
постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (МтЮрйсоп, 
ВюКаё; ДТ-96 или другие амплификаторы с аналогичными техническими 
характеристиками).
Набор (каждый из вариантов) рассчитан на проведение анализа 50 образцов, включая 
положительные контрольные образцы ДНК гельминтов и отрицательные контрольные 
образцы.
Область применения набора -  клиническая лабораторная диагностика, научные 
исследования. Только для исследований т  уДго.
2. ВАРИАНТЫ И ФОРМЫ ВЫПУСКА НАБОРА РЕАГЕНТОВ.
«Гельмо-скрин» - набор для качественного обнаружения ДНК гельминтов (Азсапз 
кштЪпсоШез, ЕШегоЫиз уегппсгёапз, Ор1з1огсЫз ГеНпеиз, Таеша зоНиш, 01рЬу11оЪоЙггшт 
1аШт) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией 
результатов амплификации в режиме реального времени.
Выпускается в двух комплектациях, различающихся степенью готовности компонентов к 
постановке амплификации:
а) комплект реагентов для амплификации (пробирки 0,2 мл -  раскатанный вариант).
б) комплект реагентов для амплификации (нераскапанный вариант),
3. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
3.1. Принцип метода
Анализ образцов включает следующие этапы:
1. Пробоподготовка (выделение ДНК из образцов биологического материала).
2. Постановка реакции ПЦР-амплификации.
2


--- стр. 3 ---
3. Детекция продуктов амплификации.
3.2. Состав набора:
Сокращенные названия амплификационных смесей: «Азе» - Азсапз 1итЪпсо1ёез, «Еу» 
- Еп1егоЫиз уеггшсикпз, «Ор1з» - Ор1з1огсЫз ГеНпеиз, «Тзо1» - Таеша зоНиш, «ЭЬ» - 
ШрЬуПоЪоШпит 1аШш, «ВК» - внутренний контроль.
«Гельмо-скрин» - набор для качественного обнаружения ДНК гельминтов включает в 
себя:
- амплификационную смесь «ПЦР-смесь «Азе»» - 50 пробирок по 10 мкл —
раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл -  нераскапанный вариант.
- амплификационную смесь «ПЦР-смесь «Еу»» - 50 пробирок по 10 мкл —
раскапанный вариант, 1  пробирка 520 мкл -  нераскапанный вариант.
- амплификационную смесь «ПЦР-смесь «Ор1з»» - 50 пробирок по 10 мкл -
раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл -  нераскапанный вариант.
- амплификационную смесь «ПЦР-смесь «Тзо1»»- 50 пробирок по 10 мкл -
раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл -  нераскапанный вариант.
- амплификационную смесь «ПЦР-смесь «ЦЬ»»- 50 пробирок по 10 мкл -
раскапанный вариант, 1 пробирка 520 мкл -  нераскапанный вариант.
- амплификационную смесь «ПЦР-смесь «ВК»» для обнаружения бактериальной 
ДНК, предназначенную для оценки качества выделения тотальной ДНК в 
анализируемых образцах - 50 пробирок по 10 мкл - раскапанный вариант, 1 пробирка 
520 мкл - нераскапанный вариант.
- раствор Тац-полимеразы - 6 пробирок по 520 мкл
- комплект положительных контрольных образцов (ПКО) - 6 пробирок по 30 мкл
- отрицательный контрольный образец -  1  пробирка 150 мкл
4. КЛИНИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ
4Л. Диагностическая чувствительность составляет 89,0 -  92,0% для показателей, 
определяемых с применением набора «Гельмо-скрин».
Для оценки диагностической чувствительности набора «Гельмо-скрин» 
использовали фекальные образцы, содержащие по данным микроскопического анализа 
яйца гельминтов (Азсапз 1ишЬпсоШез, Еп1егоЫиз уетпси1апз, Ор1з1огсЫз ГеНпеиз, Таеша 
зоНиш, ШрЬуПоЪойтит 1аШт), а также пробы, полученные добавлением лизата ДНК 
указанных гельминтов в фекальные образцы.
4.2. Диагностическая специфичность анализа при постановке тестов с применением 
набора «Гельмо-скрин» доказана методом секвенирования продуктов амплификации и 
подтверждена отсутствием перекрестных реакций между выявляемыми показателями.
5. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
4.1. Потенциальный риск применения набора -  класс 26 (Приказ М3 России от 06.06.2012 
№ 4н).
4.2. Все компоненты набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.
4.3. Меры предосторожности - соблюдение правил СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с 
микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями 
паразитарных болезней» и методических указаний МУ 1.3.2569-09 «Организация работы
3


--- стр. 4 ---
лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот, при работе с 
материалом, содержащим микроорганизмы 1-1V групп патогенности».
4.4. Утилизация отходов производится в соответствии с СанПиН N2.1.7.2790-10 
"Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами", 
сбор отходов осуществляется в одноразовые пакеты желтого цвета, предназначенные для 
утилизации медицинских отходов класса Б (ГОСТ Р 50962-96).
6. ОБОРУДОВАНИЕ, РЕАГЕНТЫ И МАТЕРИАЛЫ
1- й этап -  выделение ДНК из биопробы
-  для выделения ДНК из фекальных образцов и ректальных мазков рекомендуется к 
применению набор ДНК-ЭКСПРЕСС производства НПО «Литех» или аналоги, 
предназначенные для выделения ДНК из кала;
-ламинарный бокс 2-го класса защиты;
-центрифуга для пробирок вместимостью 1,5 мл на 3000 -  12000 об/мин; 
-микроцентрифуга-вортекс на 1500 -  3000 об/мин;
-твердотельный термостат для пробирок вместимостью 1,5 мл типа Термит, 
поддерживающий температуру до + 99°С;
-пипетки-дозаторы переменного объема со сменными наконечниками, позволяющие 
отбирать объемы жидкости 5-50; 20-200; 100-1000 мкл;
-перчатки резиновые или пластиковые одноразовые.
2- й этап - проведение ПЦР-амплификации
- комплект реагентов для проведения ПЦР;
-ПЦР-бокс с УФ-лампой;
-микроцентрифуга-вортекс на 1500 -  3000 об/мин;
-пипетки-дозаторы переменного объема со сменными наконечниками, позволяющие 
отбирать объемы жидкости 0,5 -  10; 5-50; 20-200; 100-1000 мкл;
-одноразовые наконечники с фильтром (аэрозольным барьером) 0,5 -  10; 20-200 мкл; 
-холодильник с морозильной камерой для хранения исходных реагентов;
-перчатки резиновые или пластиковые одноразовые;
-термостат программируемый (амплификатор) для проведения ПЦР с детекцией 
результата в режиме «реального времени»;
- бесцветные одноразовые полипропиленовые микропробирки вместимостью 0,2 мл для 
амплификации (для комплектации набора -  «нераскапанный»).
3- й этап - детекция продуктов амплификации:
- термостат программируемый (амплификатор) для проведения ПЦР с детекцией 
результата в режиме «реального времени»
7. ПРОБОПОДГОТОВКА
7.1. Взятие, доставка и хранение клинического материала.
Для исследования можно использовать следующий биологический материал:
- кал (для обнаружения ДНК Азсапз ЫтЪпсоЫез, ЕпЮгоЪшз уетйсЫапз, Ор 1зЮгсЫз 
РеНпеиз, Таета зоНит, Н1рЬу11оЬоШпит 1аШт);
- ректальный мазок (предпочтительный вид материала для выявления ЕпЮгоЫиз 
уегппси1апз);
Материал доставляют в лабораторию в течение суток, хранить образцы при температуре 
2-8 °С .
7.2. Предварительная обработка клинического материала не требуется.
4


--- стр. 5 ---
7.3. Выделение ДНК из фекальных образцов и ректальных мазков
ДНК желательно выделять из жидкого материала. Если образец твердый (кал), небольшое 
количество материала (не более 100 мг) ресуспендировать в транспортной среде или 
физиологическом растворе. Также возможно выделение ДНК из 
твердого материала. В этом случае небольшое количество образца 
можно перенести прямо в пробирку на кончике наконечника дозатора 
(примерное количество вносимого образца показано на рисунке).
Внимание; использование избытка материала для выделения  
может привести к ингибированию ПЦР.
8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
8.1. Подготовка ПЦР (раскапанный вариант)
1. В штатив поставить необходимое количество пробирок (в соответствии с 
количеством проб, и две пробирки для положительного и отрицательного 
контролей для смеси каждой специфичности
2. В каждую пробирку внести по 10 мкл тщательно перемешанного раствора Тац- 
полимеразы (не повреждая слой воска), закрыть пробирки.
8.2. Подготовка ПЦР (нераскапанный вариант)
1. В штатив поставить необходимое количество пробирок в соответствии с 
количеством проб, и две пробирки для положительного и отрицательного 
контролей для амплификационной смеси каждой специфичности (ПЦР-смесь 
«Азе», ПЦР-смесь «Еу», ПЦР-смесь «Ор1з», ПЦР-смесь «ТзоЬ>, ПЦР-смесь «БЬ», 
ПЦР-смесь «ВК»).
2. В каждую пробирку внести по 10 мкл соответствующей амплификационной смеси
3. В каждую пробирку внести по 10 мкл тщательно перемешанного раствора Тац-
полимеразы.
8.3. Постановка ПЦР (аналогично для раскапанного и нераскапанного вариантов)
1. В подготовленные пробирки внести по 5 мкл анализируемых проб.
2. В контрольные пробирки внести по 5 мкл положительных контрольных образцов 
соответствующей специфичности или 5 мкл ОКО. Установить все пробирки в блок 
детектирующего амплификатора.
3. Запустить программу амплификации в соответствии с параметрами, указанными в 
таблице 3.
Для внесения в пробирки реагентов, проб ДНК и контрольных образцов  
используются одноразовые наконечники с фильтрами.
Таблица 3. Программа амплификации
Температура Время Количество циклов
94°С 5 мин 1
94°С 5 сек
4558°С 6 сек
72°С 10 сек
10°С - хранение
5


--- стр. 6 ---
8.4. Регистрация результатов
Детекция продуктов амплификации.
Для анализа результатов тестов необходимо использовать канал РАМ для обнаружения 
ДНК Азсапз ктгЬпсоМез, Еп1егоЪшз уепшсикпз, Ор 1з1огсЫз ГеИпеиз, Таеша зоНиш, 
1)1рЬу11оЪоШпит 1аШт, а также бактериальной ДНК (используется в качестве внутреннего 
контроля качества выделения ДНК из фекальных образцов);
Флуоресцентная детекция продуктов амплификации осуществляется в режиме реального 
времени с использованием детектирующего амплификатора. Учет результатов следует 
начинать с результатов амплификации положительных и отрицательных контрольных 
образцов и внутреннего контроля.
9. АНАЛИЗ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Анализ результатов проводят с помощью программного обеспечения используемого 
прибора для проведения ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Результаты 
интерпретируются на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой 
флуоресценции на канале РАМ с установленной на соответствующем уровне пороговой 
линией, что определяет наличие (или отсутствие) для данной пробы значения порогового 
цикла С1.
Принцип интерпретации:
Результаты анализа не учитываются, если:
- Во время прохождения реакции детектирующий амплификатор не регистрирует 
экспоненциальный рост уровня флуоресценции в пробирке с положительными 
контрольными образцами; в данной ситуации необходимо повторное исследование  
всех образцов.
- В пробирках с ВК не регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции или 
значение порогового цикла С1 превышает допустимое значение, указанное в паспорте 
набора; в этой ситуации необходим повторный анализ всех образцов, включающий  
стадию выделения ДНК.
- В пробирке с ОКО регистрируется экспоненциальный рост уровня флуоресценции. 
Необходимо принятие мер для устранения контаминации в ПЦР-лаборатории и  
повторное исследование всех образцов.
Результаты анализа учитываются, если
- Во время прохождения амплификации регистрируется экспоненциальный рост уровня 
флуоресценции в пробирке с положительными контрольными образцами и значение 
пороговых циклов С1 для каждого из образцов не превышает допустимых значений, 
указанных в паспорте набора;
- Во время прохождения амплификации отсутствует флуоресцентный сигнал в пробирке с 
отрицательным контрольным образцом или не превышает допустимого значения, 
указанного в паспорте набора;
- Во время прохождения амплификации регистрируется экспоненциальный рост уровня 
флуоресценции в пробирке с внутренними контрольными образцами и значение 
порогового цикла С1 для каждого из образцов не превышает допустимого значения, 
указанного в паспорте набора.
- Образец положителен на наличие ДНК гельминтов (Азсапз кипЬпсоЫез, Еп1егоЫиз 
уеггшси1апз, Ор1з1;огсЫз 1'еНпеиз, Таеша зоНиш, ОхрЬуИоЪоЙшит 1а1ит), если для данной 
пробы определено значение порогового цикла, причем кривая флуоресценции данной 
пробы должна пересекать пороговую линию на участке экпоненциального роста 
флуоресценции.
6