Набор реагентов для выявления РНК вирусов гриппа А и B, субтипирования вирусов гриппа А и идентификации генетических маркеров, включая детерминанты устойчивости к противогриппозным препаратам, методом гибридизации на биологическом микрочипе (БИОГРИПП) по ТУ 9398-016-02699501-2013 — инструкция и характеристики
Открытые закупки, где изделие проходит ТЗ
Сейчас открытых закупок, где изделие полностью проходит ТЗ, нет; список обновляется каждый день.
Построчная сверка ТЗ с характеристиками этого изделия и все закупки под ваши товары — в кабинете, 7 дней бесплатно.
Попробовать бесплатно
Текст инструкции: технические характеристики
--- стр. 1 --- УТВЕРЖДЕНА Приказом Росздравнадзора от № «УТВЕРЖДАЮ» Директор Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской акаде\^^1и^наук (ИМБ РАН) А.А. Макаров 2014 г. ИНСТР по ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК ВИРУСОВ ГРИППА айв , субтипирования ВИРУСОВ ГРИППА А И ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ, ВКЛЮЧАЯ ДЕТЕРМИНАНТЫ УСТОЙЧИВОСТИ К ПРОТИВОГРИППОЗНЫМ ПРЕПАРАТАМ, МЕТОДОМ ГИБРИДИЗАЦИИ НА БИОЛОГИЧЕСКОМ МИКРОЧИПЕ (БИОГРИПП) ФГБУН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской академии наук (ИМБ РАН), Российская Федерация, 119991, г. Москва, ул.Вавилова, д. 32 --- стр. 2 --- 1 НАЗНАЧЕНИЕ НАБОРА 1.1 Наименование Набора Набор реагентов для выявления РНК вирусов гриппа А и В, субтипирования вирусов гриппа А и идентификации генетических маркеров, включая детерминанты устойчивости к (БИОГРИПП™^"'’™ препаратам, методом гибридизации на биологическом микрочипе 1.2 Набор реагентов БИОГРИПП предназначен для многопараметрического анализа генома вируса гриппа, включающего • идентификацию РНК вируса гриппа; • субтипирование вируса гриппа (тип А или тип В); • определение вариантов гемагглютинина и нейраминидазы вируса гриппа А; • идентификацию генетических маркеров патогенности и устойчивости к противогриппозным препаратам: - генетических маркеров, ассоциированных с лекарственной устойчивостью к препаратам группы адамантанов (ремантадин и амантадин); - генетических маркеров, ассоциированных с лекарственной устойчивостью к препаратам группы ингибиторов нейраминидазы (озельтамивир) (субтип N1); - генетических маркеров, определяющих состояние сайта протеолитического расщепления гемагглютинина, ассоциированного с повьппенной патогенностью вируса гриппа А (для субтипов Н5 и Н7); генетических маркеров в рамке считывания вирусного белка 1-F2, который является одним из ключевых факторов подавления вирусом гриппа иммунного ответа хозяина; - генетических маркеров в структуре PDZ-связывающего домена в сегменте Nbl, детерминирующего активацию сигнальных систем клетки, обеспечивающих контроль над противовирусным ответом. 1.3 Набор реагентов БИОГРИПП предназначен для качеетвенных определений. 1.4 Исследуемый биологический материал - мазки из полости носа и ротоглотки вирусоГ'’^^'''^^”'’™ промывные воды бронхов, секционный материал, культура 1.5 Набор реагентов БИОГРИПП рассчитан на проведение 100 анализов, включая положительные и отрицательные контроли. 1.6 Область применения набора - клиническая лабораторная диагностика вирусных инфекции, эпидемиологический надзор, научные исследования. Набор БИОГРИПП может быть использован в учреждениях медицины и здравоохранения, в том числе в диагностических лабораториях инфекционных больниц и других лечебно-профилактических учреждений, вирусологических лабораториях Центров гигиены и санитарии Роспотребнадзора, в эпидемиологических службах для быстрой расшифровки вспьнпек гриппа и для мониторинга эпидемиологической обстановки в регионах. Результаты исследования могут быть использованы для назначения рациональной противовирусной терапии. Набор БИОГРИПП не является самостоятельным диагностическим средством для скрининга вируса гриппа в клинических образцах. 2 ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА 2.1 Принцип действия 2.1.1 Определение типа, субтипа и генетических маркеров вируса гриппа с использованием набора реагентов БИОГРИПП основано на гибридизации амплифицированных фрагментов вирусного генома с соответствующими --- стр. 3 --- олигонуклеотидными зондами, иммобилизованными в ячейках биологического микрочипа (биочипа). Анализ включает следующие этапы: (1) вьщеление РНК из биологического материала; (2) реакция обратной транскрипции для получения кДНК с использованием вирусной РНК в качестве матрицы; (3) мультиплексная полимеразная цепная реакция (ПЦР) с амплификацией фрагментов вирусных сегментов МР, NA, НА, РВ1, NS и введением в процессе реакции метки - флуоресцентного субстрата; (4) гибридизация флуоресцентно-меченных продуктов на биочипе за счет комплементарного ДНК-ДНК взаимодействия между анализируемыми фрагментами генома вируса гриппа и специфичными олигонуклеотидными зондами, иммобилизованными в микроячейках полиакриламидного геля; (5) регистрация и интерпретация результатов гибридизации. 2.1.2 Биочип представляет собой подложку с зчюрядоченно расположенными гидрогелевыми элементами (192 гидрогелевых элемента), содержащими ковалентно иммобилизованные олигонуклеотидные зонды, которые обеспечивают гибридизацию со специфическими участками генома вируса гриппа, определяющими тип, субтип и генетические маркеры, включая детерминанты устойчивости к противовирусным препаратам. 2.1.3 Визуализация результатов гибридизации проводится флуоресцентным методом с помощью возбуждения флуоресценции после образования дуплекса между меченным ПЦР-продуктом и иммобилизованными на микрочипе зондами. 2.1.4 Учет результатов гибридизации проводится с использованием Комплекса универсального аппаратно-программного (УАПК) для анализа биологических микрочипов. Флуоресцентные сигналы каждой ячейки регистрируются камерой с ПЗС- матрицей и подвергаются оцифровке. Интерпретация результатов осуществляется программно в зависимости от того, с какими из иммобилизованных зондов прошла реакция гибридизации. Специальное программное обеспечение позволяет сравнить флуоресцентные сигналы в ячейках и вьщать отчет об отсутствии/наличии генетических маркеров в исследуемой РНК вируса гриппа. 2.2 Состав набора В состав набора входят следующие компоненты: а) Комплект № 1 для вьщеления геномной РНК вируса гриппа, включающий: - ЛР (лизирующий буфер) - 1 флакон (37,5 мл); - РПН (реагент для преципитации нуклеиновых кислот) - 1 флакон (50 мл); - РП № 1 (промывочный раствор № 1) - 1 флакон (60 мл); - РП № 2 (промьшочный раствор № 2) - 1 флакон (37,5 мл); - НК-буфер (буфер для растворения нуклеиновых кислот) - 4 пробирки (по 1,6 мл); - ВКО (внешний контрольный образец) - 1 пробирка (1,25 мл). Примечание: для выделения вирусной РНК из биологического материала вместо Комплекта № 1 допускается применение других коммерческих наборов и автоматических роботизированных станций, разрешенных к применению в практике клинико- диагностических лабораторий, например, набор реагентов «Проба НК» ООО «ДНК- Технология», Россия. б) Комплект № 2 для подготовки образцов для гибридизации, включающий: - RT-mix (раствор для проведения реакции обратной транскрипции) - 1 пробирка (1 25 мл); - RT-G-mix (смесь реагентов для проведения реакции обратной транскрипции) - 1 пробирка (0,05 мл); --- стр. 4 --- - M-MLV (фермент обратная транскриптаза) - 1 пробирка (0,063 мл); - ПЦР-буфер (10-кратный буфер для проведения ПЦР) - 1 пробирка (1,5 мл) - nP-mixl (водный раствор смеси праймеров 1 для проведения ПЦР) - 1 пробирка (0 125 мл); - nP-mix2 (водный раствор смеси праймеров 2 для проведения ПЦР) - 1 пробирка (0 125мл); V » - nP-mix3 (водный раствор смеси праймеров 3 для проведения ПЦР) - 1 пробирка (0 125 мл); ’ - UNG (фермент урацил ДНК-гликозилаза) - 1 пробирка (0,07 мл); - Taq (фермент Taq-полимераза) - 1 пробирка (0,18 мл); дНТФ (водный раствор дезоксинуклеозидтрифосфатов для проведения ПЦР) - 1 пробирка (1,5 мл); - ФС (флуоресцентно-меченный субстрат) - 1 пробирка (0,07 мл); - MQ (вода деионизованная) - 3 пробирки (2,0 мл); ~ (положительный контрольный образец) — 1 пробирка (1,6 мл); - К- (отрицательный контрольный образец) - 1 пробирка (1,6 мл). ' Примечание: для проведения обратной транскрипции допускается применение других коммерческих наборов, основанных на обратной транскрипции с рандомными праймерами, разрешенных к применению в практике клинико-диагностических лабораторий, например, набор реагентов «РЕВЕРТА-L» производства ФГБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора. в) Комплект № 3 для проведения гибридизации на биологическом микрочипе включающий ’ - ГБ (буфер для гибридизации) - 2 пробирки (по 1,5 мл). г) Комплект № 4 включает биологические микрочипы, каждый из которых рассчитан на проведение одного анализа (гибридизации) - 100 шт. (10 коробок х 10 шт.). 3 АНАЛИТРГЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА 3.1 Набор реагентов БИОГРИПП осуществляет: - выделение РНК из биологического материала (мазки из носоглотки и ротоглотки, аспираты из трахеи, бронхоальвеолярный лаваж, промьгоные воды бронхов, секционный материал, культура вирусов); — идентификацию РНК вируса гриппа и определение типовой принадлежности вируса гриппа: тип А, тип В; - субтипирование вируса гриппа А с определением 16 молекулярных вариантов гена гемагглютинина (Н1-Н16) и 9 молекулярных вариантов гена нейраминидазы (NbN9); — молекулярный анализ генетических маркеров, включающих: - генетические маркеры S31N, V27A, АЗОТ, L26F в гене М2 вирусного сегмента МР, ассоциированные с лекарственной устойчивостью к препаратам группы адамантанов (ремантадин и амантадин). - генетический маркер H274Y в гене нейраминидазы субтипа N1, ассоциированный с лекарственной устойчивостью к препаратам группы ингибиторов нейраминидазы (озельтамивир); - генетический маркер, определяющий состояние сайта протеолитического расщепления гемагглютинина, ассоциированного с повыщенной патогенностью вируса гриппа А для субтипов Н5 и Н7; - генетические маркеры, определяющих наличие мутации N66S, а также стоп-кодонов (в 12 положении, в 58 положении) в рамке считьшания вирусного белка PB1-F2; --- стр. 5 --- - генетические маркеры в структуре PDZ-связьшающего домена в сегменте NS1 детерминирующего активацию сигнальных систем клетки, обеспечивающих контрол^ над щютивовирусным ответом (длину белка NS1 («length variation range») LVTO LVT - r„n„ri RSFv/ ™“ ®да“ ™сти аминокислот а8КУ(низкопатогенный вадиант, CTEV(BnB)) вариант, (вив)), Е8ЕУ(впв), Е8КУ(впв), 3.2 Набор обеспечивает проведение многопараметрического анализа с использованием ^ореецентнои детекции гибридизационных сигналов от амплифицированных участков гриппа, полученной при проведении реакции обратной транскрипции РНК вируса, и иммобилизованных на биочипе олигонуклеотидных зондов. идентификации вируса и определения его типа еоста^ет 510 геном-эквивалентов вируеа гриппа (количество копий в одной реакционной пробирке при проведении ПЦР). 3.4 Диагностические специфичность и чувствительность при идентификации вируса и определения его типа, субтипа и профиля генетических маркеров в клинических обр^цах составляют не менее 98,5»/о и 85,5% соответственно (оценка функциоиадГи““ характеристик осуществлялась путем сопоставления е данными анал!з^^нГеск“ образцов с помощью аттестованных наборов реагентов, а также на основе анализа музейных тест-штаммов). 4 МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 6 применения набора - класс 26 (п. 9.3 приказа М3 РФ № 4н от 4.2 К работе с набором допускается только специально обученный персонал. 4.3 Работу с набором реагентов следует проводить в ПЦР лаборатории, выполняющей молекулярно-биологические исследования клинического материада на н” СадПиН болезней. Необходимо соблюдать требования документов 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами Ш-1У групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарньк болезней», СанПиН 2 1 7 2790- 10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами», методических указаний (МУ) 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом’ содержащим микроорганизмы 1-1У групп патогенности» и МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения». «эдслии ГП 08®'’^ ““ “ реактивы следует убирать и дезинфицировать в соответствии с U1 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарньк болезней» и МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения». 4.5 Неиспользованные и использованные реактивы, а также реактивы с истекшим сроком г^ости следует утилизировать в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами». 4.6 Анализ должен проводиться в отдельньк помещениях (зонах). Выделение РНК следует проводить в зоне I, обратную транскрипцию и ПЦР-амплификацию - в зоне II, --- стр. 6 --- гибридизацию и анализ результатов — в 'чпнр тгт тго 4.7 Подготовку реакционных смесей для проведения ПТТР рп ламинарном шкафу (ПЦР-боксе). ^ ^ следует проводить в соблюдать меры предосторожности. использовании необходимо Sp. Г " - -р -ь » . — 10 % раствор хлорной извести, 5 % раствор хлорамина Б; 6% раствор перекиси водорода сбрасыва.ьс” Г а л Г ” п р о д ^ ПЦР-ам„л„фикац„„, нанесения ПЦР- содержащих ПЦР-прод щгы, н а к о н е ™ Г Г 1 Т о н т а ^ с Т ш -н ™ * ^ лабораторн^^^зо^^^^ привести к контаминации имеющие" контакт с п К Г ™ л о л ж ^ ~ “ ® “ «^он«™ики, дезинфицирующим раствором. ’ немедленно сбрасываться в емкость с помещения, в начала и после окончания работ облучяты излучения в области 260 нм в течение 1 ч Ультрафиолетовой лампой с максимумом помещен^!!! п р ед н Х ч ен н ^ !!^ ^ ^ ® 4.16 Набор следует применять строго по назначению, согласно данной инструкции 4.17 Не допускается использовать набор и его компоненты по истечении срока годности. 5 ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ 5.1 Выделение РНК (зона I) ( Ш = Г ^ д ^ воке ™ i , S ЛМ (Ламинарные системы), бокс фирмыS cock, Г ерм ан^ (220.180) Ёр3 ; «Эппендорф» до 14000 об/мин, например, MiniSpin М И Н И центрифуга/вортекс для микропробиоок Г2000 of^/мми^/ и г» микропробирок, например, «ТЭТА-2», « L okom», Р оссия; ^ «“^«^ватель вихревой для --- стр. 7 --- -термостат для микроцентрифужных пробирок вместимостью 0,5 и 1,5 мл, поддерживающий температуру до плюс 95,0±0,5оС, например, «Гном», ’«ДНК- Технология», Россия; -пипетки полуавтоматические одноканальные, позволяющие отбирать объемы жидкости от 10 до 1000 мкл,; - наконечники пластиковые стерильные с аэрозольным барьером для дозирования жидкостей объемом от 10 до 1000 мкл с маркировкой DNase, RNase free; - пробирки пластиковые стерильные типа «Эппендорф» с маркировкой DNase, RNase free вместимостью 0,5 и 1,5 мл с крышками; - штатив для микропробирок; - холодильник, поддерживающий температуру от +2 до +8°С, с морозильной камерой с температурой не выше минус 16 °С для вьщеленных проб РНК; - отдельный халат, шапочки и одноразовые перчатки; - емкость с дезинфицирующим раствором. 5.2 Проведение обратной транскрипции и ПЦР (зона II). - бокс абактериальной воздушной среды для работы с ДНК-пробами (ПЦР-бокс) для подготовки ОТ и ПЦР смесей, например, БАВ-ПЦР-"Ламинар-С" (код 610.100), ЗАО «Ламинарные системы», Россия; - бокс абактериальной воздушной среды для работы с ДНК-пробами (ПЦР-бокс) для внесения проб, например, БАВ-ПЦР-"Ламинар-С" (код 610.100), ЗАО «Ламинарные системы», Россия; мини-центрифуга/вортекс для микропробирок, позволяющая развивать ускорение до 2000 об/мин / встряхиватель вихревой для микропробирок, например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия; - ДНК-амплификатор (термоциклер) автоматический, например, «С 1000», «Biorad», США; -пипетки полуавтоматические одноканальные, позволяющие отбирать объемы жидкости от 0,1 до 200 мкл; - наконечники пластиковые стерильные с аэрозольным барьером для дозирования жидкостей объемом от 0,1 до 200 мкл с маркировкой DNase, RNase free; -холод^ьник, поддерживающий температуру от плюс 2 до плюс 8°С, с морозильной камерой с температурой не вьппе минус 16 °С для хранения компонентов ПЦР реакции; - морозильная камера не вьппе минус 16®С для хранения образцов кДНК; - отдельный халат, шапочки и одноразовые перчатки; - емкость с дезинфицирующим раствором; - минеральное масло для ПЦР-амплификаторов без горячей крышки. 5.3 Проведение гибридизации и учет результатов (зона III). - Комплекс универсальный аппаратно-программный (УАПК) для анализа биочипо ООО “БИОЧИП-ИМБ”, Россия; - бокс абактериальной воздушной среды для работы с ДНК-пробами (ПЦР-бокс), например, БАВ-ПЦР-"Ламинар-С" (код 610.100), ЗАО «Ламинарные системы», Россия; - термостат суховоздушный закрытый, поддерживающий температуру плюс 37,0 ± 0,5°С, например, Thelco Incubator 2DG; фирма Thelco, США; 7 --- стр. 8 --- -термостат для микроцентрифужных пробирок вместимостью 0,5 и 1,5 мл, поддерживающий температуру до плюс 95,0±0,5“С, например, «Гном», «ДНК-Технология»’ Россия; ’ - мини-центрифуга/вортекс для микропробирок, позволяющая развивать ускорение до 2000 об/мин / встряхиватель вихревой для микропробирок, например, «ТЭТА-2», «Биоком» Россия; ’ - источник питания для горизонтального электрофореза, например, «Эльф-2» «ООО ДНК- Технология», Россия; - камера для горизонтального электрофореза, например, SE-1, Хеликон, Россия; - система гель-документации, например Gel Doc EQ, Biorad, Италия; - пипетки полуавтоматические одноканальные, позволяющие отбирать объемы жидкости от 1 до 100 мкл,; - наконечники пластиковые стерильные с аэрозольным барьером для дозирования жидкостей объемом от 1 до 100 мкл с маркировкой DNase, RNase free; - пробирки пластиковые стерильные типа «Эппендорф» с маркировкой DNase, RNase free вместимостью 0,5 мл с крьппками; - штатив для микропробирок; - морозильная камера с температурой не выше минус 16°С для хранения продуктов амплификации; - лампа ультрафиолетовая с максим>^ом излучения в области 260 нанометров, например лампа ДБ-60, Россия; - отдельный халат, шапочки и одноразовые перчатки; - емкость с дезинфицирующим раствором; - вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72); - буфер для электрофореза (например, ТАЕ-буфер). 6 ПОДГОТОВКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА М^ки из полости носа и ротоглотки. Содержимое закрытой пробирю! перемешать на вортексе и центрифугировать в течение 5 с при 5000 об/мин на микроцентрифуге для удаления капель с внутренней поверхности крьппки пробирки. Для вьщеления РЖ отобрать 100 мкл образца. Бронхоальвеолярный лаваж или промывные воды бронхов. Содержимое закрытой пробирки перемешать на вортексе и центрифугировать в течение 10 мин при 10000 об/мин. Отобрать надосадочную жидкость, используя наконечник с фильтром, оставляя над осадком 200 мкл жидкости, в которой ресуспендировать осадок. Для вьщеления РНК отобрать 100 мкл полученной суспензии. Секционный материал гомогенизировать с использованием стерильных фарфоровых ступок и пестиков, затем приготовить 10% суспензию на стерильном физиологическом растворе либо фосфатном буфере. Суспензию перенести в пробирку 1,5 мл и центрифугировать при 10000 об/мин в течение 5 мин. Для вьщеления РНК отобрать 100 мкл надосадочной жидкости. Культура—вирусов. Растворить 10 мкл культуральной жидкости в 90 мкл деионизированной воды. Для вьщеления РНК отобрать 100 мкл получившегося раствора. 8 --- стр. 9 --- 7 ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА 7.1 Подготовка реагентов для анализа 7.1.1 Раствор для лизиса ЛР (комплект № 1) (если он хранился при температуре от +2 до +8°С) прогреть при температуре +65°С до полного растворения кристаллов. 7.1.2 Раствор ГБ (комплект № 3) прогреть при температуре +37°С в течение 30 мин перед проведением гибридизации. 7.2 Вьщеление геномной РНК (комплект № 1) 7.2.1 Отобрать необходимое количество пробирок вместимостью 1,5 мл и промаркировать «1», «2», «3»... «N» (N - число анализируемых образцов). Внести в каждую пробирку по 300 мкл раствора ЛР и по 10 мкл ВКО. 7.2.2 Добавить в пробирки по 100 мкл подготовленных проб, используя наконечники с аэрозольным барьером. 7.2.3 Содержимое пробирок тщательно перемешать на вортексе в течение 3-5 с и прогреть 15 мин при температуре + 65°С в термостате. 7.2.4 Осадить конденсат центрифугированием при 1000 об/мин в течение 5 с. В кажд>чо пробирку добавить 400 мкл раствора РПН и перемешать пробы на вортексе в течение 3-5 с. 7.2.5 Центрифугировать пробирки при 14000 об/мин в течение 15 мин. 7.2.6 Не задевая осадок, полностью удалить надосадочную жидкость (отдельным наконечником из каждой пробирки). Добавить к осадку 500 мкл промывочного раствора РП №1, плотно закрыть крьппки и 3-5 раз аккуратно перевернуть пробирки. 7.2.7 Центрифугировать пробирки при 14000 об/мин в течение 5 мин. 7.2.8 Не задевая осадок, полностью удалить надосадочную жидкость (отдельным наконечником из каждой пробирки). Добавить к осадку 300 мкл промывочного раствора РП №2, плотно закрыть крьппки и 3-5 раз аккуратно перевернуть пробирки. 7.2.9 Центрифугировать пробирки при 14000 об/мин в течение 5 мин. 7.2.10 Не задевая осадок, полностью удалить надосадочную жидкость (отдельным наконечником из каждой пробирки). 7.2.11 Открыть крьппки пробирок и высушить осадки при температуре + 65°С в течение 5 мин. 7.2.12 Добавить в пробирки по 50 мкл НК буфера и прогреть пробы при температуре +65°С в течение 10 мин. 7.2.13 Осадить капли центрифугированием пробирок при 1000 об/мин в течение 3- 5 с. Пол)^енные препараты РНК использовать для постановки реакции обратной транскрипции. 7.3 Проведение обратной транскрипции (ОТ) (комплект № 2) 7.3.1 Отобрать необходимое количество пробирок вместимостью 0,2 или 0,5 мл и промаркировать «1аг», «2от», «Зот»-.. «No t» (N - число анализируемых образцов). 7.3.2 Приготовить реакционные смеси для проведения ОТ. Подготовить одну микроцентрифужную пробирку вместимостью 0,5 мл и промаркировать ее «OTmix»; внести в пробирку следующие компоненты набора в указанных ниже последовательности и количестве: RT-mix 10 X (N) мкл; RT-G-mix 0,4 х (N) мкл; MMLV 0,5 X (N) мкл, N- число анализируемых образцов. 7.3.3 Перемешать на вортексе. Осадить капли с крьппки пробирки кратковременным центрифугированием.