Набор реагентов для иммуноферментного выявления специфических lgG антител к Treponema pallidum в сыворотке (плазме) крови "СИФИЛИС-ИФА" по ТУ 9398-111-18619450-2010 — инструкция и характеристики

РУ: ФСР 2011/09582 от 24.03.2011 · класс риска 2б

Производитель: ООО "ХЕМА" (Россия)

Вид изделия: Treponema pallidum антитела класса иммуноглобулин G (IgG)/IgM ИВД, набор, иммуноферментный анализ (ИФА)

В госконтрактах 44-ФЗ: 4 контракта, медианная цена за единицу 2 404 ₽.

Автоматически отфильтрованный фрагмент инструкции по применению (страницы, где похоже, что есть таблица технических характеристик) — не полный документ. Карточка РУ на портале Росздравнадзора →

Текст инструкции: технические характеристики

--- стр. 1 ---
: УТВЕРЖДЕНА 
j Приказом Росздравнадзора
от
№
2010 г.
ИНСТРУКЦИЯ
<УТВЕРЖДАЮ» 
р ООО «ХЕМА» 
Ю. С. Лебедин 
» января 2010 г.
по применению Набора реагентов для иммуноферментного выявления специфических  
IgG антител к Treponema pallidum  в сыворотке (плазме) крови  
«СИФИЛИС-ИФА»
1. НАЗНАЧЕНИЕ.
1.1. Набор реагентов «СИФИЛИС-ИФА» предназначен для выявления специфических 
IgG антител к Treponema pallidum  в сыворотке (плазме) крови человека методом твердофазного 
иммуноферментного анализа.
1.2. Сифилис - широко распространенное инфекционное заболевание, возбудителем 
которого является грамотрицательная спирохета Treponema pallidum.  Болезнь характеризуется 
повреждениями кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, костей и нервной системы. Это 
системная инфекция, при которой периоды активных проявлений болезни чередуются со 
скрытыми периодами.
1.3. Первичными маркерами специфического иммунного ответа после инфицирования 
Treponema pallidum  являются специфические антитела класса IgM, которые регистрируются со 
второй недели после заражения и достигают наивысшего уровня в крови на 6-9 неделе. На 
четвертой неделе после заражения организм начинает вырабатывать специфические антитела 
класса IgG (период первичного серопозитивного сифилиса). После успешно проведенного 
лечения содержание антител класса IgG в крови постепенно снижается, но у некоторых лиц. 
переболевших сифилисом, иммуноглобулины этого класса могут сохраняться длительное время 
и определяться чувствительными серологическими методами.
1.4. К серологическим методам диагностики сифилиса относятся: реакция Вассермана, 
реакция микропреципитации и её аналоги (VDRL-тест, RPR-тест), реакция гемагглютинации и 
наиболее чувствительный тест -  иммуноферментный анализ (ИФА).
1.5. На сегодняшний день в иммуноферментных тест-системах для диагностики 
сифилиса используется комплекс рекомбинантных антигенов -  синтетические аналоги 
липопротеинов Treponema pallidum  с молекулярными массами 15; 17; 41-45 и 47 кДа {р15; р17; 
ТтрА и р47 соответственно}.
1.6. Диагностическая значимость определения.
Выявление специфических IgG антител к Treponema pallidum,  в клини' 
используется обычно для следующих^  ^^'РАНИЧЕННОЙ
ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ-  диагностика сифилиса;
'шли!-  мониторинг эффект 1^р^^^'^^^ 1^АШи^РгЙ^ 1Й1 1?я сиф


--- стр. 2 ---
1.7. Область применения -  клиническая лабораторная диагностика.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА.
2.1. Принцип работы Набора. Определение специфических IgG антител к Treponema  
pallidum  основано на использовании «сэндвич»-варианта твердофазного иммуноферментного 
анализа.
На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизован комплексный 
высокоочищенный рекомбинантный антиген Treponema pallidum  {pI5; р17; р41 и р47}.
В лунках планшета, при добавлении исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови, во 
время инкубации, происходит специфическое связывание IgG антител, содержащихся в 
исследуемом образце, и антигена на твердой фазе.
Введение в состав Буфера для разведения исследуемых образцов сыворотки (плазмы) 
крови мышиного миеломного белка (неспецифичные мышиные иммуноглобулины) позволяет 
исключить ложноположительные перекрестные реакции (например, с ревматоидным фактором).
Отмывка лунок планшета позволяет удалить избыток непрореагировавших компонентов.
Во время инкубации с конъюгатом происходит образование иммунного комплекса 
«антиген Treponema pallidum твердой фазы - специфические  IgG антитела (исследуемый  
образец)  -  мышиные моноклонапьные anmuAgG антитела, конъюгированные с пероксидазой  
хрена (конъюгат)».
Отмывка лунок планшета позволяет удалить избыток непрореагировавших компонентов.
Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит 
специфическое связывание пероксидазы (конъюгат) с раствором субстрата тетраметилбензидина 
(ТМБ), сопровождающееся изменением окраски содержимого лунок. Интенсивность окраски 
прямо пропорциональна содержанию специфических IgG антител к антигену Treponema pallidum  
в исследуемом образце.
Регистрация результатов реакции производится измерением оптической плотности 
содержимого лунок планшета на спектрофотометре при длинах волн 450 нм и 620 нм.
2.2. Состав Набора:
планшет 96-луночный стрипированный с сорбированным на внутренней поверхности лунок 
синтетическим рекомбинантным комплексным антигеном Treponema pallidum  {pi 5; pi 7; TmpA; 
p47, молекулярные веса 15; 17; 41-45 и 47 кДа соответственно}; готов к использованию - 1 шт.; 
положительная контрольная сыворотка на основе инактивированного пула сывороток крови 
человека с высоким содержанием IgG антител к антигенам Treponema pallidum;  готова к 
использованию - 1 пробирка или флакон (0,7 мл);
отрицательная контрольная сыворотка рд(((^р^^ира^^;^ш|рованн^ пула 
человека, не содержащих IgG антител к антиг^й5г6 готов^^спол^зЪйа^ию
- 1 пробирка или флакон (1,8 мл); ГеНЕРДЛЬНЫИ^’лИРЕНЮР
концентрат конъюгата (мышиные 6ФЛй)1|Ыо^йр1йЙыС Т  ^


--- стр. 3 ---
конъюгированные с пероксидазой хрена}; 11-кратный концентрат - 1 флакон (1,0 мл);
Буфер для разведения концентрата конъюгата; готов к использованию - 1 флакон (14 мл);  
Буфер для разведения образцов; готов к использованию - 1 флакон (14 мл);  
раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ); готов к использованию - 1 флакон (11 мл);  
концентрат отмывочного раствора; 21-кратный концентрат - 1 флакон (22 мл);  
стоп-реагент; готов к использованию - 1 флакон (11 мл);
липкая лента с бумажной подложкой для заклеивания планшета; готова к использованию - 2 
шт.
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
3.1. Диагностическая чувствительность.
При проверке на стандартной панели сывороток крови человека, содержащих 
специфические IgG антитела к Treponema pallidum -  «АТ (+\-) Т. pallidum»  (производитель ЗАО 
«Медико-Биологический Союз», Россия, кат. № А-090), «Набор образцов сывороток, 
содержащих и не содержащих антитела к Treponema pallidum  для внутрилабораторного 
контроля качества ИФА-исследований на антитрепонемиые IgG и суммарные антитела» 
(производитель ЗАО «Вектор-Бест», Россия, зарегистрирован в РФ, РУ № ФСР 2009/05494, кат. 
№ D-1840) диагностическая чувствительность Набора реагентов «СИФИЛИС-ИФА» составляет 
100%.
Положительный образец для внутрилабораторного контроля (производитель ООО 
«Научно-производственное объединение Диагностические Системы», Россия, кат. № L-531) 
был определен как положительный в 150 повторах в Наборе реагентов «СИФИЛИС-ИФА».
При проверке на стандартной панели предприятия (СПП № 111SS «Сыворотки крови  
человека, содержагцие специфические IgG антитела к Treponema pallidum для проверки  
чувствительности»,  утвержденной генеральным директором ООО «ХЕМА» 10.09.2009 г., 
ООО «ХЕМА», Россия), состоящей из 300 образцов сывороток и плазмы крови человека 
положительных в реакции Вассермана и реакции микропреципитации, диагностическая 
чувствительность Набора реагентов «СИФИЛИС-ИФА» составляет 100%.
3.2. Диагностическая специфичность.
При проверке на стандартной панели сывороток крови человека, не содержащих 
специфические IgG антитела к Treponema pallidum -  «АТ (+\-)7’. pallidum»  (производитель ЗАО 
«Медико-Биологический Союз», Россия, кат. номер А-090), «Набор образцов сывороток, 
содержащих и не содержащих антитела к Treponema pallidum  для внутрилабораторного 
контроля качества ИФА-исследований на антитрепонемиые IgG и суммарные антитела» 
(производитель ЗАО «Вектор-Бест», Россия, зарегистрирован в РФ, РУ № ФСР 2009/05494, кат. 
№ D-I840) диагностическая специфичность Набора реагентов «СИФИЛИС-]^А^Л^оставляет
1 0 0 % . ОБЩЕСТПО ^ ^Г^Аг/ИЧЕННОЙ
OTBETCTREHHOClblO 
• Х Е М А - 
Генеральный д и р е к т о р 
Лебедин Ю рий С тепа н о в ич
3


--- стр. 4 ---
При проверке на стандартной панели предприятия (СПП № 11ISP «Сыворотки крови  
человека, не содержащие IgG антитела к Treponema pallidum для проверки специфичности»,  
утвержденной генеральным директором ООО «ХЕМА» 10.09.2009 г. ООО «ХЕМА», Россия), 
состоящей из 280 образцов сывороток и плазмы крови человека, диагностическая 
специфичность Набора реагентов «СИФИЛИС-ИФА» составляет 100%.
3.3. Воспроизводимость.
Коэффициент вариации (К.В.) результатов выявления специфических IgG антител к 
Treponema pallidum  в одном и том же образце сыворотки (плазмы) крови с использованием 
Набора реагентов «СИФИЛИС-ИФА» не превышает 8,0%.
3.4. Сравнение Набора с аналогами.
При разработке и апробации Набора реагентов «СИФИЛИС-ИФА» в качестве 
референсного изделия медицинского назначения использовался Набор реагентов для  
иммуноферментного выявления антител класса IgG к Treponema pallidum «РекомбиБест  
антипачлидум-IgG»  производства ЗАО «Вектор-Бест», РФ (зарегистрирован в РФ, РУ № ФСР 
2007/00616, кат.№П-1851, 1852).
При проведении сравнения результатов на массиве образцов сывороток (плазм) крови 
здоровых доноров и пациентов с подтвержденными диагнозами показана высокая корреляция 
(кг >0,95) между Наборами реагентов «СИФИЛИС-ИФА» и «РекомбиБест антипаллидум-lgG».
4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ.
4.1. Потенциальный риск применения Набора - класс 26 (ГОСТ Р 51609-2000).
4.2. Меры предосторожности-соблюдение «Правт устройства, техники безопасности,  
производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в  
лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы  
Министерства здравоохранения СССР»  (Москва, 1981 г).
5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ:
- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую 
плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм;
-дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкости 
в диапазоне 20-250 мкл;
- цилиндр мерный вместимостью 500 мл;
- вода дистиллированная;
- перчатки резиновые или пластиковые;
- бумага фильтровальная.
6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ
АНАЛИЗА.
6.1. Перед проведением анали9^й11С11<8!СЬйх10/НЧ1ЙФР^^1|^^с^^едуемые 
(плазмы) крови следует выдержать при комнатн^|^:^й^ 1^а^ре (+18-25 °С)
6.2. Образцы сыворотки для ан
Леве««« Юри* Сррл.иоГ*,
4


--- стр. 5 ---
хранить при температуре +2-8 не более 24 ч или при температуре минус 20 не более 2 
недель.
6.3. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную, мутную 
сыворотку (плазму) крови, а также сыворотку (плазму) крови, содержащую азид натрия.
6.4. Приготовление планшета.
Вскрыть пакет с планшетом и установить на рамку необходимое количество стрипов. 
Вскрытые стрипы следует использовать в течение 1  ч, длительному хранению не подлежат. 
Оставшиеся неиспользованными стрипы, чтобы предотвратить воздействие на них влаги, 
необходимо тщательно заклеить липкой лентой для заклеивания планшета и хранить в 
упаковке при температуре +2-8 в течение всего срока годности Набора.
6.5. Приготовление отмывочного раствора.
Содержимое флакона с концентратом отмывочного раствора перенести в мерный 
цилиндр вместимостью 500 мл, добавить 440 мл дистиллированной воды и тщательно 
перемешать.
В случае дробного использования Набора следует отобрать необходимое количество 
концентрата отмывочного раствора и развести дистиллированной водой в 20 раз (1 объем 
концентрата + 19 объемов дистиллированной воды).
Приготовленный отмывочный раствор допускается хранить при комнатной температуре 
(+18-25 ‘^С) не более 2 сут. или при температуре +2-8 V  не более 10 сут.
6.6. Приготовление конъюгата.
Развести концентрат конъюгата в 11 раз Буфером для разведения концентрата конъюгата.
Например, смешать 1,0 мл Буфера для разведения концентрата конъюгата и 100 мкл 
концентрата конъюгата.
Тщательно перемешать приготовленный конъюгат, избегая вспенивания.
Конъюгат следует готовить непосредственно перед внесением в лунки планшета.
Приготовленный конъюгат длительному хранению не подлежит.
7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА.
7.1. Поместить в рамку планшета необходимое количество стрипов -  исследуемые 
образцы сыворотки (плазмы) крови в дубликатах, 1  проба положительной контрольной 
сыворотки и 3 пробы отрицательной контрольной сыворотки.
7.2. Внести во все лунки планшета по 80 мкл Буфера для разведения образцов.
7.3. Внести в соответствующие лунки в дубликатах по 40 мкл положительной 
контрольной сыворотки и отрицательной контрольной сыворотки.
В остальные лунки внести в дубликатах по 40 мкл исследуемых образгщв сыворотки 
(п„а,„ь,) кр„™,
При внесении исследуемых образцов сыВА^с^Р'"' '
г
происходит изменение цвета Буфера дл!< |Й*|^4чщ^^разц(м.
«т cZ Z ,
5


--- стр. 6 ---
Внесение образцов в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин.
7.4. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями по
горизонтальной поверхности, заклеить планшет липкой лентой для заклеивания планшета и 
инкубировать его в течение 30 мин при температуре +37 ± 0,1°С.
7.4. По окончании инкубации удалить содержимое лунок аспирацией (например, с 
помощью водоструйного насоса) или декантированием и промыть лунки планшета 5 раз путем 
добавления во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора. Перемешать содержимое планшета 
круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией или
декантированием. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки
жидкости из лунок постукиванием планшета в перевернутом положении по фильтровальной 
бумаге.
7.5. Внести во все лунки планшета по 100 мкл конъюгата.
Внесение конъюгата в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин.
7.6. Аккуратно перемешать содержимое планшета круговыми движениями по
горизонтальной поверхности, заклеить планшет липкой лентой для заклеивания планшета и 
инкубировать его в течение 30 мин при температуре +37 ± 0,1°С.
1.1. По окончании инкубации удалить содержимое лунок аспирацией (например, с 
помощью водоструйного насоса) или декантированием и промыть лунки 5 раз (см. п. 7.4.).
7.8. Внести во все лунки планшета по 100 мкл раствора субстрата тетраметилбензидина
(ТМБ).
Внесение раствора субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) в лунки планшета 
необходимо произвести в течение 1-2 мин.
Инкубировать планшет в темноте при комнатной температуре (+18-25 ^С) в течение 15- 
30 мин в зависимости от степени развития синего окрашивания.
7.9. Внести во все лунки планшета с той же скоростью и в той же последовательности, 
как и раствор субстрата тетраметилбензидина (ТМБ), по 100 мкл стоп-реагента; при этом 
содержимое лунок окрашивается в ярко-желтый цвет.
Внесение стоп-реагента в лунки планшета необходимо произвести в течение 1-2 мин.
8. РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ.
8.1. Измерить величину оптической плотности (ОП) в лунках планшета на фотометре 
вертикального сканирования при двух длинах волн - 450 нм (референсный светофильтр) и 620 
нм (дифференциальный светофильтр).
Допускается также измерение оптической плотности на одной длине волны - 450 нм, в 
этом случае бланк фотометра следует выставлять по лунке с раствором субстрата 
тетраметилбензидина (ТМБ) и стоп-реагентом. ^ ^
Измерение ОП растворов в лунках ii)©ttf№T 9CHe(0^ g tg ^ ^ ^ o ^ g B e c T H  mi
после внесения стоп-реагента. О ТВЕ НЮ
В случае невозможности cвoeвpeмfI-^fPfpд^g^|j^^JJ^p^(^П^^acтвo|
Лебедин Юрий Степано вич
6


--- стр. 7 ---
фотометре, планшет допускается хранить при температуре +2-8 °С не более 4 ч.
9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ.
9.1. Рассчитать среднее арифметическое значение оптической плотности для лунок, 
содержащих отрицательную контрольную сыворотку.
срОП(ОКС) = {ОП,(ОКС) + ОП 2(ОКС) + ОПз(ОКС)} / 3
9.2. Прибавить к полученному значению коэффициент 0,3 (граничное значение  
оптической плотности,  ОПТ или «cut off»):
«cut off» = срОП(ОКС) + 0,3
9.3. Рассчитать диапазон т.н. «серой зоны» (значения ОП, которые находятся в пределах 
10,0% ниже граничного значения «cut off»):
«cut off» * 0,9 < «серая зона» < «cut off»
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:
9.4. Для каждого исследуемого образца сыворотки (плазмы) крови рассчитать результат 
анализа:
При значении ОПобр < «серой зоны» исследуемый образец считать серонегативным 
(отрицательным).
При значении ОПог,,, > «cut off» исследуемый образец считать первично 
серопозитивным (положительным).
В этом случае следует провести повторный анализ.
После повторного тестирования серопозитивными (положительными) считаются
образцы, ОПобр которых хотя бы в одном из двух повторов была выше или равнялась «cut off».
Если при повторном тестировании ОПобр в обоих повторах ниже «cut off», то такой 
образец следует считать серонегативным (отрицательным).
Если ОПобр находится в пределах «серой зоны», такой результат следует считать 
недостоверным и образец следует исследовать повторно.
10. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА.
10.1. Набор реагентов «СИФИЛИС-ИФА» должен храниться в упаковке предприятия- 
изготовителя при температуре +2-8 в течение всего срока годности (12 мес.).
Допускается хранение (транспортировка) Набора при температуре до +25 не более 5
сут.
10.2. Набор рассчитан на проведение анализа в дубликатах 46 неизвестных образцов, I  
пробы положительной контрольной сыворотки и 3 проб отрицательно контрольной  
сыворотки - всего 96 определений при использовании всего комплекта стрипов.
10.3. В случае дробного Hcno^^|j:^ja^gg ^аб^а^ ^компоненты сд 
следующим образом: ОТВЕТСТОЕННОСТЬЮ
- вскрытые стрипы следует испол 1^з^^^^^^в^'Р^^ние 1 ч, длитель!
Лебедин Юрий Степанович \ ХЕМА h}!